刘龙燕　孟　伟　刘国燕　邹学森　陈岳青　王春阳



SiHa细胞对化疗药物联合GIK液的敏感性研究

刘龙燕孟伟刘国燕邹学森陈岳青王春阳

目的研究宫颈癌SiHa细胞对GIK液联合化疗药物顺铂的体外敏感性。方法采用MTT法测定宫颈癌SiHa细胞对3种不同浓度GIK液联合顺铂的体外敏感性。结果不同浓度的GIK液联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞的生长抑制作用比单独使用顺铂更强。结论顺铂联合使用GIK液在体外对肿瘤细胞的抑制效果比单独使用顺铂更好，但不与GIK液浓度呈递增关系。

GIK；顺铂； 体外；抗肿瘤

(The Practical Journal of Cancer,2016,31:1234～1235)

GIK液(glucose-insulin-potassium)俗称极化液是，作为1种“老药新用”被广泛应用于除心血管以外的各领域[1]，前期工作也表明了单独使用GIK液对肿瘤细胞具有一定的抑制作用[2]。

本实验通过顺铂联合不同浓度的GIK液作用于体外培养的宫颈癌SiHa细胞，借助MTT法检测其抑制率，并对实验结果进行分析。

1　材料与方法

1.1主要仪器和试剂

酶标仪购自雷博公司；CO2恒温培养箱购自三洋公司；超净工作台购自苏州净化设备厂；台式离心机购自长沙相仪离心机仪器有限公司；生物显微镜购自OLYMPUS公司； MTT(上海普飞技术有限公司)；DMSO(二甲基亚砜,西安化学试剂厂)；肿瘤细胞株(SiHa)由南昌大学医学院药理教研室提供；DPP和GIK液配制所需药物均由本单位药房提供；DMEM细胞培养液购自NEURONBC公司；优质胎牛血清购自GIBCO公司。

1.2方法

1.2.1GIK液配置参照文献[3]用等渗盐水配制含葡萄糖、胰岛素(武汉生物试剂有限公司)和氯化钾终浓度分别为100 g/L、80 U/L、5 g/L的GIK液。

1.2.2抗癌药物按以前测定的IC50剂量为参考值，一组培养基内分别加入3种不同浓度的GIK液和同一浓度的顺铂作用细胞48 h，该药物3种检测浓度分别为120、240和480 μg/ml。另一组培养基内分别加入不同浓度的GIK液作用细胞48 h。

1.2.3肿瘤细胞培养肿瘤细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液，于37 ℃，5%CO2培养，用0.25%胰酶-0.02%EDTA消化，传代，收集增殖旺盛、状态良好的细胞，用细胞培养液悬浮后，计数肿瘤细胞，调整肿瘤细胞浓度为200 μl，悬液中含有细胞数为4 000。

1.2.4细胞存活率测定将细胞接种于96孔细胞培养板中每孔200 μl,置于37 ℃，5%CO2培养箱中培养24 h,待细胞贴壁后，随机分GIK液组、顺铂组、GIK液+顺铂组以及对照和调零组。GIK组加入终浓度为120、240和480 μg/ml的GIK液；GIK液+顺铂组在以上基础上再加入终浓度为25 μg/ml的顺铂；顺铂组加入终浓度为25 μg/ml的顺铂；每种药物浓度设有6个平行复孔。同时设对照组，用等量的10%胎牛血清的DMEM培养液代替抗肿瘤药物作为对照组，置37 ℃含5%CO2的培养箱中培养48 h每孔加10 μl 浓度为5 mg/ml 的MTT继续培养4 h弃去上清液再加DMSO 100 μl 溶解，用酶标仪测定490 nm吸光度。

2　结果

不同浓度的GIK液联合顺铂以及单独使用顺铂作用于宫颈癌SiHa细胞48 h后，呈现出对细胞增殖活性的不同程度的抑制。见表1和图1。

表1　GIK液+DPP对SiHa细胞生长的影响

注：A的F值为1125.307，B的F值为3773.079，C使用时F值为388.542。本研究属多个样本均的比较，采用ANOVA方差分析，结果表明各实验组宫颈癌SiHa细胞的抑制率不同 (P<0.01)。

单独使用GIK液，随着浓度的增加，细胞增殖呈下降趋势与前期工作一致；GIK+DPP联合使用时，随着GIK液浓度的增加，细胞增殖趋势呈上升趋势，抑制率呈下降趋势。本研究结果表明各实验组宫颈癌SiHa细胞的抑制率不同 (P<0.01)； GIK液的120 μg/ml组与240 μg/ml组以及GIK+DPP 240 μg/ml与480 μg/ml组比较差异无统计学意义(P>0.01)；其余各组间两两比较( P<0.01)，见图1。

图1　GIK液+DPP对SiHa细胞生长的抑制率

3　讨论

肿瘤细胞的特征是失控性生长。因此，抗肿瘤药物的研究首先是观察其抗肿瘤细胞生长的作用。本实验结果显示：不论是单独使用GIK液还是联合DDP在安全剂量范围内，对肿瘤细胞都有较高的抑制作用。肿瘤作为全身性疾病，抗肿瘤药物即对肿瘤细胞也对正常细胞具有杀伤作用，因个体差异会出现让病人苦不堪言的若干不同程度的副作用如：脱发、恶心、呕吐等。为了减轻病人的反应和提高抗肿瘤药物的疗效，临床使用了化疗辅助用药。

GIK液使用安全，治疗成本低，在前期工作中，已经证明单独使用GIK液能够抑制SiHa细胞的增殖[2]。本次实验通过3种不同浓度的GIK液联合DDP作用SiHa细胞均能抑制肿瘤细胞增殖。结果显示，GIK液的120 μg和240 μg组以及GIK+DPP的240 μg和480 μg组差异无统计学意义(P>0.01)，但是，作用最显著的是GIK液120 μg+DDP组，此结果提示药物联用存在药物协同或拮抗作用。由于药物的相互作用，GIK+DDP对肿瘤细胞的增殖抑制，GIK的剂量不呈量效关系。提示临床用药，在联合用药时，当药物达到一定浓度，其抑制率不再升高，反而给机体带来一定的毒副作用。GIK液对机体免疫功能、血液流变以及肿瘤细胞凋亡的影响有待进一步研究。

MTT法反映了肿瘤细胞群体对药物的敏感性，简便、快速、经济，与疗效密切相关。因此，MTT法近几年较广泛应用予临床恶性肿瘤(白血病、胃癌、肺癌、脑胶质瘤、乳腺癌)的化疗药敏检测[4]。

[1]Quinn DW,Pagano D,Bonser RS,et al.Glucose and insulin influences on heart and brain in Cardiac surgery〔J〕.Semin Cardiothorac Vasc Anesth,2005，9(2):173-178.

[2]刘龙燕,孟伟,刘国燕，等.CCK-8检测GIK液对肿瘤细胞的生长抑制作用〔J〕.实验与检验医学,2012,30(5):430-432.

[3]钱学贤.极化液、胰岛素保护缺血/再灌注的新机制―又一个老药新观点的典范〔J〕.中华内科杂志,2003,42:145-147.

[4]吕青，呈中,裒淑兰.Mflr法检测乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的研究〔J〕.四川医学，2001，22(3)：269.

(编辑：吴小红)

Research on Sensitivity of SiHa Cells to Chemotherapeutic Drug and GIK Solution

LIU Longyan，MENG Wei,LIU Guoyan,et al.

Jiangxi Cancer Hospital,Nanchang，330029

ObjectiveTo study the response of cervical cancer SiHa cells to the combination of GIK solution with drug cisplatin in vitro.MethodsMTT assay was used to test the sensitivity of SiHa cells to 3 different concentrations of GIK solution plus cisplatin.ResultsThe antitumor effect of combination treatment was stronger than the cisplatin treatment alone in SiHa cells.ConclusionThe combination of GIK solution and cisplatin exhibited enhanced antitumor effects in SiHa cells,but GIK solution is not doses dependent.

GIK;Cisplatin;In vitro;Antitumor

330029 江西省肿瘤医院(刘龙燕,邹学森,陈岳青,王春阳)；330006 南昌大学第一附属医院(孟伟)；330006 江西省妇幼保健院(刘国燕)

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.08.005

R73-36

A

1001-5930(2016)08-1234-02

2015-09-07

2016-01-17)