李晶泉林衡丁宁左晓雪史晋萍徐永平冷春玲杨春光

（1. 大连理工大学生命科学与技术学院，大连 116024；2. 大连大学医学院，大连 116622；3. 辽东学院农学院，丹东 118003）

类弹性蛋白标签在大肠杆菌周质空间中表达研究

李晶泉1林衡2丁宁2左晓雪2史晋萍2徐永平1冷春玲3杨春光2

（1. 大连理工大学生命科学与技术学院，大连 116024；2. 大连大学医学院，大连 116622；3. 辽东学院农学院，丹东 118003）

旨在研究类弹性蛋白［I］40（elastin-like polypeptide［I］40，ELP［I］40）在大肠杆菌周质空间的表达。构建表达载体pIG6LH/ELP［I］40及pIG6LH/ELP［I］40+Trx，分别将构建的表达载体转化入表达宿主菌E. coli BLR（DE3），IPTG诱导表达，采用可逆相变循环（Inverse transition cycling，ITC）技术纯化蛋白。测定ELP［I］40及ELP［I］40+Trx蛋白相变温度（Tt），检测ELP［I］40、ELP［I］40+Trx蛋白浓度及NaCl对相变温度的影响。结果显示，经3轮ITC纯化得到了ELP［I］40、ELP［I］40+Trx蛋白。分别测定ELP［I］40和ELP［I］40+Trx在10、25、50、75和100 μmol/L浓度下的Tt，其Tt依次为31.5℃、29℃、27℃、26℃、25℃和31.8℃、29.5℃、27.5℃、26℃、25.5℃；测定了不同浓度的NaCl对Tt影响，在ELP［I］40和ELP［I］40+Trx终浓度为25 μmol/L，NaCl浓度为0.25、0.5、0.75、1.00和1.25 mol/L时，分别使ELP［I］40的Tt由29℃降至24.5℃、22℃、19℃、15℃和11.5℃，使ELP［I］40+Trx的Tt由29.5℃降至25℃、23℃、20.2℃、15.5℃和11.8℃。在大肠杆菌周质空间表达的ELP［I］40与胞内表达的具有相同的理化性质，ELP可作为在大肠杆菌周质空间表达的蛋白质分离纯化标签。

类弹性蛋白标签；硫氧还蛋白；大肠杆菌；周质空间；分离纯化

大肠杆菌是内膜和外膜组成的双层膜结构，在内外膜之间的区域称为周质空间（Periplasmic Space）［1-3］，在大肠杆菌周质空间的氧化环境有利于重组蛋白正确折叠，形成正确的二硫键，直接形成具有生物活性的重组蛋白，在周质空间中蛋白质更稳定［4］。而胞内表达重组蛋白多为包涵体，这种表达方式产量虽高，但要经过变性-复性等复杂步骤后才能获得活性蛋白，且只能部分蛋白获得活性［1-5］。……