利用酵母双杂交系统筛选雷竹SOC1相互作用蛋白
2016-09-14潘现飞施泉林新春徐英武曹友志
潘现飞 施泉 林新春 徐英武 曹友志
(浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地,临安 311300)
利用酵母双杂交系统筛选雷竹SOC1相互作用蛋白
潘现飞 施泉 林新春 徐英武 曹友志
(浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室培育基地,临安 311300)
在雷竹(Phyllostachys violascens)中找到SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CONSTANSl(SOCl)在开花途径中的作用靶标,进一步探索SOCl的作用机制。构建pGBKT7-PvSOC1诱饵表达载体,通过SMART技术构建开花时期的雷竹cDNA文库,酵母双杂交筛选与SOC1互作的蛋白,并对其进行分析鉴定。结果显示,成功构建了可用于酵母双杂交的cDNA文库,文库的转化率为每微克pGADT7-Rec 3.0×106转化子,文库滴度为7.5×106cfu/mL,插入片段主要在250-2 000 bp之间。通过酵母双杂交实验得到与诱饵蛋白PvSOC1相互作用的蛋白,筛选到的靶标蛋白经鉴定是一个富含亮氨酸的蛋白激酶,特征氨基酸序列在不同物种中非常保守,与水稻中的同源蛋白亲缘性最高。
雷竹;SOC1;cDNA文库;酵母双杂交;蛋白质互作
开花是高等植物由营养生长向生殖生长转变的重要标志[1],MADS-box基因家族编码一类转录因子,在调控植物开花时间和花形态形成中发挥重要作用[2],而SOCl是MADS-box基因家族的一员,能够介导来自光周期途径、春化途径、自主途径和赤霉素途径的花时基因信号[3],作用于下游花分生组织特异基因,促进植物开花,是参与植物开花的一个重要基因,对SOC1蛋白及与其相互作用蛋白的研究对探究植物开花有很大帮助。
雷竹(Phyllostachys violascens)为禾本科竹亚科刚竹属竹种,是中国特有的优良经济竹种。雷竹开花现象十分普遍[4],观察结果显示,雷竹开花时间不规律,开花前具有一些明显的预兆,表现为雷竹笋出土时间提早,产量低,个体比正常笋较小,颜色偏红。……
