叶致豪，许文豪，刘庆华，沈金花，彭勇波

(中南民族大学生命科学学院医学生物研究所，武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室，武汉　430074)



小鼠气管平滑肌原代细胞的分离、培养与鉴定

叶致豪，许文豪，刘庆华，沈金花，彭勇波*

(中南民族大学生命科学学院医学生物研究所，武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室，武汉430074)

目的建立一种可靠的通过组织块贴壁法分离培养原代小鼠气管平滑肌细胞及免疫组化鉴定的方法。方法体视显微镜下立体分离小鼠气管平滑肌组织，组织块贴壁法培养原代细胞，对分离培养细胞通过免疫组化方法进行鉴定，并用MTT法对其增殖特性进行检测。结果从BALB/c雄性小鼠分离气管平滑肌组织，剪碎为1mm3，用含1%青-链霉素的PBS及培养液漂洗，使组织块贴于培养皿底，并加入5mL培养液，放入37℃、5%CO2的细胞培养箱培养，3～5d后有明显梭状细胞从组织块爬出，5～6d后，细胞可见明显“峰-谷”结构。经免疫荧光鉴定，在传代、纯化后，可得纯度为99%以上的气管平滑肌细胞。用MTT法测量其生长曲线。结论本方法操作简单、经济，获得的气管平滑肌细胞具有较好增殖能力，细胞数量和纯度能够满足后续细胞生物学实验研究的需要。

气管平滑肌细胞；原代培养；组织块贴壁法；免疫荧光；MTT法；小鼠

哮喘是一种常见的气道慢性炎症性疾病，目前我国有约2000万人罹患哮喘[1, 2]。近些年，由于雾霾等空气质量与环境污染程度的日益恶劣，呼吸系统疾病也逐渐成为了全世界范围影响人类健康最严重的慢性疾病之一，据世界卫生组织预测，到2025年，世界上将会有4亿人患上哮喘[3, 4]。……