孔庆辉，晁燕，夏明哲，祁得林*

(1. 青海大学 农牧学院动物科学系，西宁　810016；2. 青海大学 生态环境工程学院，西宁　810016)



黄河裸裂尻鱼MSTN基因RNA干扰研究

孔庆辉1，晁燕1，夏明哲2，祁得林1*

(1. 青海大学 农牧学院动物科学系，西宁810016；2. 青海大学 生态环境工程学院，西宁810016)

目的 利用反义寡合甘酸技术抑制肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN)的表达，评估MSTN基因的沉默效果，并检测RNA干扰后对下游基因的影响。方法 通过构建黄河裸裂尻鱼(Schizopygopsispylzovi)MSTN基因RNA干扰(RNAi)重组腺病毒载体1P3(DSP MSTN 273+250+1737)和1P2(DSP MSTN 195+1670)，并将其注射黄河裸裂尻鱼肌肉组织，进行活体RNA干扰；利用real-time PCR和Western blotting评估MSTN基因的沉默效果，并检测MSTN基因RNA干扰后肌肉肌酸激酶(muscle-type creatine kinase, M-CK)基因转录水平的调控作用。结果real-time PCR分析结果表明，与HK组(病毒通用阴性对照组)和N组(空白对照组)相比，重组腺病毒载体1P3对黄河裸裂尻鱼肌肉MSTN基因的转录具有明显的干扰作用(P<0.05)，抑制率达53.5%；而重组腺病毒载体1P2对MSTN基因的转录无明显干扰作用(P>0.05)。Western-blotting分析结果与real-time PCR结果相一致。同时，经1P3干扰后随着MSTN基因转录水平的下降，其肌肉肌酸激酶M-CK基因表达水平显著上升。结论 通过RNAi技术能够有效的抑制MSTN基因的表达，并能够上调M-CK基因的表达量。因此，证明了在黄河裸裂尻鱼中MSTN能够抑制M-CK的转录。揭示高原土著鱼类MSTN基因的对肌肉的生长发育起到调控作用。

黄河裸裂尻鱼；RNA干扰；肌肉生长抑制；肌酸激酶；表达

黄河裸裂尻鱼(Schizopygopsispylzovi)隶属鲤形目(Cypriniformes)鲤科(Cyprinidae)裂腹鱼亚科(Schizothoracinae)，在青藏高原东北部黄河干支流和湖泊以及柴达木水系中广泛分布[1]，同其他裂腹鱼亚科鱼类一样，黄河裸裂尻鱼具有性成熟迟、繁殖力低、生长期短、生长缓慢的典型生物学特性。……