郑　云　白焕焕



EGFR和TGF-α在胃癌组织中表达的意义

郑云白焕焕

目的探讨EGFR和TGF-α的表达情况与胃癌临床病理特点的相关性。方法对行胃癌根治术以及术后化疗的110例患者采集标本，并做固定、包埋、切片、免疫荧光染色，检验EGFR和TGF-α表达的含量。以正常胃黏膜组织45例作为对照，对比正常组织和病理组织EGFR和TGF-α表达有无统计学差异；对比EGFR和TGF-α在同一患者胃癌组织和癌旁组织中表达有无统计学差异；判断EGFR和TGF-α的表达水平与患者总体生存期、肿瘤大小、肿瘤分级、肿瘤复发有无相关性。结果EGFR在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中阳性率分别为8.89%、52.73%、43.64%。TGF-α在正常胃黏膜组织、癌旁组织和胃癌组织中阳性率分别为11.11%、57.27%、49.09%。正常胃黏膜组织中EGFR和TGF-α的表达与癌旁组织、胃癌组织比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。EGFR和TGF-α的表达呈正相关。高表达与低表达EGFR、TGF-α的患者在总体生存期、肿瘤大小、肿瘤分级、肿瘤复发率等指标上有统计学差异。结论EGFR和TGF-α在胃癌组织及癌旁组织中表达较正常胃黏膜显著升高，EGFR和TGF-α表达呈正相关，且高表达EGFR和TGF-α的患者预后较差。

EGFR；TGF-α；胃癌

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:892～894)

胃癌是我国最常见的癌症之一，发病率在男性中为第2位，女性中为第3位；同时也是最凶险的癌症之一，死亡率在男性中为第3位，女性中为第2位。目前胃癌依然主要依靠手术治疗，但是即使是通过规范的胃癌切除术，局部复发率仍然可高达22%[1]。当前，提高术后总体生存率和无进展时间的关键在于更好地理解肿瘤的分子特性，筛选出高复发风险人群，寻找潜在的化疗靶点。在临床实验中，人们发现EGFR和TGF-α在多种癌细胞上高表达[2]。本课题的目的在于探讨EGFR、TGF-α在正常组织和胃癌组织中表达水平的差异以及高表达EGFR、TGF-α对胃癌患者预后的影响。

1　材料与方法

1.1一般资料

挑选我院普外科自2001年1月至2007年1月收治的行胃癌根治术以及术后化疗的患者110例进行研究。所有患者随访开始时的年龄在34～59岁，平均年龄为(47.1±9.8)岁，均已进行长达8～14年的电话及门诊随访，并保存手术切除标本，研究过程中未有患者失访。入选标准：①经病理证实为2～3级胃癌；②行胃癌根治术，术中证实胃癌为Ⅱ～Ⅲ期，手术过程顺利，术后无严重并发症；③无其它任何严重的基础疾病(包括感染、遗传疾病、自身免疫疾病、营养不良、代谢疾病、内分泌疾病等)，卡氏评分在60分以上，预期生存时间大于2个月，各器官功能正常；④贲门癌不在此研究范围之内，因为其复发率、总体生存时间与其他胃癌出入过大，可能影响结果[3]；⑤入选病例男女比例接近，均为中青年。⑥所有患者均被告知实验事宜，本课题已取得其知情同意。另外选取30例正常胃黏膜组织作为阴性对照。

1.2方法

1.2.1标本的处理组织原位免疫荧光染色采用SP法(streptacidin perosidase)，操作如下：①新鲜标本在中性福尔马林缓冲液中固定24 h，然后用石蜡包埋。②对石蜡块连续切片，厚度4 μm，68 ℃烤片20 min。镜下检查确认切片内无出血、坏死区。③二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水。④灭活内源性过氧化物酶：用3%过氧化氢溶液37%温箱内孵育10 min，使用PBS溶液冲洗3次。⑤修复抗原：在0.01 M枸橼酸buffer中水浴15～20 min(95 ℃)，然后去除自然冷却20 min，PBS溶液冲洗3遍。⑥用奶粉封闭，37 ℃温箱孵育10 min，倒掉奶粉溶液。⑦滴上EGFR小鼠单克隆抗体(DakoCytomation公司，加利福尼亚州，美国)4 ℃冰箱过夜，用PBS溶液冲洗3次(阴性小鼠单克隆抗体为对照组)。滴上生物素二抗，在37 ℃温箱中孵育30 min。PBS溶液冲洗3次。⑧滴加辣根过氧化物酶标记的工作液，37 ℃温箱孵育30 min，PBS冲洗3遍。⑨DAB显色液显色(北京索莱宝科技有限公司)，清水冲洗，苏木精复染。⑩酒精脱水，树胶封片。

1.2.2蛋白表达水平检测标准[4]根据免疫染色评分半定量检测EGFR和TGF-α的原位表达水平。该评分包含比例评分和亮度评分。比例评分反映了阳性染色的细胞数(0分，<5%，同阴性对照；1分，5～10%；2分，10～50%；3分，50～75%；4分，>75%)，亮度评分反映了染色的强度，即单个细胞内蛋白的表达水平(0分，无染色，同阴性对照；1分，弱阳性；2分，中等阳性；3分，强阳性)。检测始终由同一个对实验内容并不了解的技术员单盲完成。最后将比例评分和亮度评分相加，得到的分值反映了蛋白表达水平，定义为L值。实验前即定下评判标准：L值<2分为阴性，≥2分为阳性。

1.3观察指标

正常组织、癌旁组织、胃癌组织L值；患者总体生存时间(overall survival，OS)，肿瘤分级、大小，术后有无淋巴结转移，有无复发。

1.4统计学分析

采用SPSS19.0软件(Stata Corp.TX，美国)处理数据，显著性检验采用χ2检验，Fisher确切概率法，检验水准为α=0.05。相关性检验采用t检验，检验水准为α=0.05。

2　结果

2.1EFGR在正常胃黏膜组织、癌旁组织、胃癌组织中L值对比

正常胃黏膜组织的EGFR、TGF-α的L值以及阳性例数较癌旁组织、胃癌组织均有统计学差异(P<0.05)。癌旁组织的EGFR、TGF-α的L值、阳性例数与胃癌组织相比无统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1　EFGR、TGF-α在正常胃黏膜组织、癌旁组织、胃癌组织中L值及阳性例数比较

注：*为与正常组比较，P<0.05。

2.2EGFR、TGF-α表达水平和胃癌临床病理特点的关系

癌旁组织中阳性表达与阴性表达EGFR、TGF-α的胃癌在肿瘤直径、肿瘤分级、总体生存时间、复发率均有统计学差异(P<0.05)。胃癌组织中阳性表达与阴性表达EGFR、TGF-α的肿瘤在肿瘤直径、肿瘤分级、总体生存时间、复发率均有统计学差异(P<0.05)。同为阳性表达EGFR、TGF-α的肿瘤组织在肿瘤直径、肿瘤分级、总体生存时间上与同为阴性表达EGFR、TGF-α的肿瘤组织相比，有统计学差异(P<0.05)。见表2。

表2　EGFR、TGF-α表达水平和患者肿瘤临床病理特点的关系数据比较±s)

注：NnE1：EGFR在癌旁组织中阴性数；NpE1：EGFR在癌旁组织中阳性数；NnE2：EGFR在胃癌组织中阴性数；NpE2：EGFR在胃癌组织中阳性数；NnT1：TGF-α在癌旁组织中阴性数；NpT1：TGF-α在癌旁组织中阳性数；NnT2：TGF-α在胃癌组织中阴性数；NpT2：TGF-α在胃癌组织中阳性数；Nn：胃癌组织中EGFR与TGF-α均呈阴性数；Np：胃癌组织中EGFR与TGF-α均呈阳性数。

3　讨论

通过本课题的研究，我们得出以下结果：①EGFR和TGF-α在胃癌组织、癌旁组织中的表达明显高于正常胃黏膜组织；②EGFR或者TGF-α表达高者肿瘤直径更大、分级更高、总体生存时间降低，预后不佳。两者合并阳性预后更差。

目前，人们已经认识到：上皮细胞膜上广泛分布着EGFR家族，家族成员有：EGFR(ErbB1/HER-1)、HER-2(ErbB2)、HER-3(ErbB3)和HER-4(ErbB4)[5]。EGFR家族是一种跨膜蛋白受体，具有酪氨酸激酶活性，结构上可分为细胞内区、细胞外区、跨膜区3部分[5-6]。TGF-α是继EGF后第2个发现的可与EGFR结合的配体[2]。

动物实验表明：EGF、TGF-α在正常组织中对于抑制胃酸分泌、保护并促进胃黏膜生长有重要作用[7]。但过度表达这两种蛋白又会带来一系列的病理变化：人们在过度表达TGF-α的小鼠组织中观察到，其肝脏、胰腺、胃肠的上皮均过度增生，并且会导致乳腺的癌前病变，尽管数个器官均比正常小鼠大，但是由于正常结缔组织、脂肪组织和骨的萎缩，体重反而减轻[2]。

另外，EGF/TGF-α-EGFR系统是一种奇特的自分泌系统，即配体由某细胞合成并释放，最终仍然作用于该细胞上的受体。EGFR配体与其结合，可自身介导EGFR二聚化，形成二聚体，二聚体再实现受体的自磷酸化，激活酪氨酸激酶受体(RTK)，RTK引发下游一系列的信号转导通路活化，如：PI3K/Akt/mTOR通路、Ras/Raf/MEK/ERK-MAPK通路等，最终作用于转录因子。在肿瘤细胞中EGFR、TGF-α的过度表达，加上其自分泌能力，将会导致肿瘤细胞增殖、浸润、转移并抑制肿瘤细胞凋亡及促进肿瘤细胞血管生成[8-12]。这些研究成果为本课题的展开提供了理论依据，并与本课题结果相吻合。

人们亦根据以上的研究进展开发出了针对EGFR家族的靶向药物，目前其主要分为两大类：一类是作用于细胞外区的单克隆抗体，通过竞争性抑制配体与受体的结合，使受体失去活性，从而影响肿瘤细胞的生长，如西妥昔单抗、曲妥珠单抗等；另一类是作用于细胞内区的小分子酪氨酸激酶抑制剂，干扰与三磷酸腺苷(ATP)的结合，抑制酪氨酸激酶磷酸化，阻断信号转导过程，如吉非替尼、拉帕替尼等。但西妥昔单抗在胃癌治疗中的疗效尚不明确，已经开展的多项研究结果显示，西妥昔单抗联合化疗一线治疗晚期胃癌的风险比为44.1%～68.6%，二线治疗为3.6%～23.0%，尚无充实的依据证实西妥昔单抗联合化疗能够明显改善晚期胃癌患者的预后[6]。这些尚待解决的临床问题为本课题继续深入开展提供了方向。

综上所述，高表达EGFR和TGF-α是胃癌进展的风险因素，但他们同时也是潜在的治疗靶点，有待临床进一步的重视和研究。

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(编辑：甘艳)

The Expression of EGFR and TGF-alpha in Gastric Cancer

ZHENGYun，BAIHuanhuan.

TCMHospitalofBaoji，Baoji，721000

ObjectiveTo discuss the relationship between expression level of EGFR，TGF-α and the pathological characteristic of gastric cancer.Methods110 patients underwent radical operation of gastric cancer were selected.All patients received follow-up visits for 8～14 years and their specimens were preserved after surgery.The collected specimens were fixed，embedded，slided and received immunofluorescently stain，the expression level of EGFR and TGF-α were detected.The expression level of EGFR with TGF-α in normal gastric epithelial tissues，para-carcinoma tissues and gastric cancer tissues were compared.The relationship between high expression of EGFR，TGF-α and overall survival，tumor size，tumor grade，and recurrence rate were detected.ResultsPositive expression rates of EGFR in normal gastric epithelial tissues，para-carcinoma tissues and gastric cancer tissues was 8.89%、52.73%、43.64%，respectively.Positive expression rates of TGF-α in normal gastric epithelial tissues，para-carcinoma tissues and gastric cancer tissues was 11.11%、57.27%、49.09%，respectively.There was a statistical difference in the expression of EGFR，TGF-α in the 2 different tissues(P<0.05).There was a positive correlation between the expression level of EGFR and TGF-α.There were statistic differences in overall survival，tumor size，tumor grade，recurrence rate of patients with different expression of levels of EGFR and TGF-α.ConclusionEGFR and TGF-α’s expression levels are higher in para-carcinoma tissues and gastric cancer tissues than in normal gastric epithelial tissues.High expression level of EGFR and TGF-α suggests bad outcomes.

EGFR；TGF-α；Gastric cancer

721000 陕西省宝鸡市中医医院(郑云);719000 陕西省榆林市中医医院(白焕焕)

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.06.007

R735.2

A

1001-5930(2016)06-0892-03

2015-07-09

2016-05-17)