张彦波，肖　磊，张文娟，张清华，董　策，张希太（.邯郸市农业科学院，河北邯郸05600；.邯郸市农业局，河北邯郸05600）

小麦SRAP-PCR反应程序的优化及引物筛选

张彦波1，肖磊1，张文娟2，张清华1，董策1，张希太1
（1.邯郸市农业科学院，河北邯郸056001；2.邯郸市农业局，河北邯郸056002）

为建立最佳的小麦SRAP-PCR反应体系，进一步对小麦品种进行遗传多样性分析，采用L9（34）正交试验设计，对小麦SRAP-PCR程序中的变性时间、复性时间、延伸时间以及后35个循环的复性温度进行了优化试验。结果表明：当小麦SRAP-PCR扩增程序以变性30 s、复性60 s、延伸60 s，后35个循环复性温度55益时，扩增效果最好。应用该体系从65对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的23对引物组合，验证了该体系具有稳定性和可靠性，可进一步用于小麦的分子标记、辅助育种与遗传分析研究。

小麦；SRAP-PCR反应程序；条件优化；引物筛选

序列相关扩增多态性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）是继RAPD和SSR以后出现的新型分子标记技术，由美国加州大学蔬菜系的Li和Quiros博士于2001年提出[1]。通过设计独特的双引物，对基因的ORFs（Open reading frames）特定区域进行扩增，其中，上游引物长17 bp，对外显子区域进行特异扩增；下游引物长18 bp，对内含子区域、启动子区域进行特异扩增。因不同个体以及物种的内含子、启动子与间隔区长度不同而产生多态性。该标记具有简便、高效、产率高、高共显性、重复性好、易测序、便于克隆目标片段的特点，目前已成功地应用于作物遗传多样性分析、遗传图谱构建、重要性状标记以及相关基因克隆等方面[2，3]。

SRAP-PCR反应程序采用复性变温法扩增，最初Li等[1]设计的程序为94益预变性5 min；……