李杨钧　章　维.宁波市第二医院肝胆、微创外科，浙江宁波　3500；.宁波市第二医院消化科，浙江宁波　3500

Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的表达及相关性研究

李杨钧1章维2
1.宁波市第二医院肝胆、微创外科，浙江宁波315010；2.宁波市第二医院消化科，浙江宁波315010

目的探讨Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的表达，并探讨二者之间的相关性。方法选择2013年12月～2015年12月在我院手术治疗的胆管细胞癌患者40例（A组）手术标本作为研究对象，同时取癌旁胆管组织30例（B组）。另外选取同期手术的10例正常组织（肝血管瘤旁正常肝内胆管组织或者肝外伤后切除肝组织的正常肝内胆管组织）作为对照（C组）。比较各组Survivin与Caspase-3表达的阳性率与临床病理参数的关系，及Survivin在胆管细胞癌中的表达与Caspase-3的相关性。结果Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的阳性率分别为75.0%、40.0%，其中Survivin在A组中的阳性率显著高于B组、C组，差异有统计学意义（P＜0.05）。而Caspase-3在A组中的阳性率低于B组、C组，差异有统计学意义（P＜0.05）。Survivin、Caspase-3在胆管细胞癌中的表达与分化程度及淋巴结转移有密切关系，差异有统计学意义（P＜0.05）。胆管细胞癌中Survivin阳性30例，Caspase-3阳性16例，二者均为阳性7例，二者均为阴性1例，应用相关分析显示，Survivin在胆管细胞癌中的表达与Caspase-3呈负相关（r=-0.723，P＜0.05）。结论Survivin在胆管细胞癌中的阳性表达率较高，但Caspase-3较低，二者呈负相关，考虑可能是Survivin抑制了Caspase-3介导的细胞凋亡，对Survivin与Caspase-3的研究有助于深入了解胆管细胞癌的发生、发展机制。

胆管细胞癌；Survivin；Caspase-3；相关性

［Abstract］Objective To investigate the expression of Survivin and Caspase-3 in cho1angiocarcinoma and to exp1ore the corre1ation between the two.Methods 40 cases（group A）with cases of bi1e duct carcinoma were se1ected as the study subjects，and 30 cases（group B）were co11ected from the surgica1 treatment of cho1angiocarcinoma in our hospita1 during December 2013 to December 2015.In addition，10 cases of norma1 1iver tissue（norma1 intrahepatic bi1e duct tissue or 1iver injury after 1iver trauma）were se1ected as contro1 group（group C）.The re1ationship between the expression of Survivin and in each group，the re1ationship between the positive rate of Caspase-3 expression and the c1inicopatho-1ogica1 parameters，and the corre1ation between the expression of Survivin and the expression of Caspase-3 in cho1angiocarcinoma were compared.Results The positive rates of Survivin and Caspase-3 in cho1angiocarcinoma were 75.0% and 40.0%，respective1y.The positive rate of Survivin in group A was significant1y higher than that in group B and group C（P＜0.05）.And the positive rate of Caspase-3 in group A was 1ower than that of group B and group C（P＜0.05）. The expression of Caspase-3 and Survivin was c1ose1y re1ated to the degree of differentiation and 1ymph node metastasis，and the difference was statistica11y significant（P＜0.05）.Bi1e duct ce11 carcinoma survivin in 30 cases of positive，caspase-3 was positive in 16 cases，both were positive in 7 cases，two were negative in 1 case，the app1ication corre1ation ana1ysis showed that survivin in bi1e duct carcinoma and the expression of Caspase-3 was negative1y corre1ated （r=-0.723，P＜0.05）.Conclusion The positive expression of Survivin in ce11s of bi1e duct cancer rate is high，but caspase-3 is 1ow，the second is negative1y re1ated，consider possib1e is by inhibition of caspase-3 apoptosis mediated by Survivin.The research of Survivin and Caspase-3 he1ps to understanding the deve1opment mechanism of cho1ahgiocarcinoma.

［Key words］Cho1angiocarcinoma；Survivin；Caspase-3；Corre1ation

胆管细胞癌（cho1angiocarcinoma）是常见的消化系统恶性肿瘤之一，近年来发病率逐年升高。胆管细胞癌的发生发展与其他肿瘤一样，其发生发展是多因素、涉及多基因改变和多阶段致病的复杂过程［1］。随着胆管细胞癌发病机理研究的深入，已发现胆管细胞癌的发生、发展与细胞凋亡密切相关。Survivin是近年来发现的凋亡抑制因子（inhibitor of apoptosis proteins，IAps）家族中的一个新成员，是调控细胞凋亡的凋亡抑制因子之一，具有抑制细胞凋亡，并通过有丝分裂促进转化细胞异常增殖的作用［2］。Survivin在人体内几乎所有的恶性肿瘤中均有表达，而在正常分化的成人组织中除子宫内膜、胎盘和胸腺组织外无表达［3］。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）是ICE家族重要成员，是细胞凋亡信号通路下游最主要的执行分子之一，研究证实，Caspase-3广泛分布于各种不同类型的细胞中，表达在多种正常组织中，包括淋巴结、骨髓、上皮等：在某些恶性肿瘤组织中也有表达［4］。近年来关于二者间的关系研究显示，Survivin通过与微管蛋白形成复合物抑制凋亡蛋白酶Caspase-3的活性，从而抑制凋亡，同时具有抑制凋亡效应蛋白酶Caspase-3活性、参与细胞周期调控及调节细胞有丝分裂等作用［5］。目前临床关于二者在肿瘤中入胃癌、结肠癌、肝癌中表达的情况及相关性研究较多，但关于二者在胆管细胞癌中的表达研究报道较少，本研究旨在通过免疫组织化学（免疫组化）SP法检测Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的表达，并探讨二者之间的相关性，现报道如下。

1　对象与方法

1.1研究对象

选择2013年12月～2015年12月在我院手术治疗的胆管细胞癌患者40例手术标本作为研究对象（A组），术前未行放化疗，其中男22例，女18例，年龄28～78岁，平均（61.3±7.2）岁；其中≤60岁者10例，＞60岁者30例，分化程度：高分化6例，中分化10例，低分化24例。伴周围淋巴结转移29例，转移部位包括肝、胆囊、肠系膜、胰腺，十二指肠等。同时取癌旁胆管组织30例（B组），其中男16例，女14例，年龄28～76岁，平均（61.2±6.8）岁。另外选取同期手术的10例正常组织（肝血管瘤旁正常肝内胆管组织或者肝外伤后切除肝组织的正常肝内胆管组织）作为对照（C组），其中男6例，女4例，年龄28～72岁，平均年龄（52.8±6.7）岁；三组间的性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2试剂与方法

1.2.1试剂浓缩型鼠抗人Survivin单克隆抗体、浓缩型兔抗人Caspase-3多克隆抗体、免疫组化S-P试剂盒（即用型），购自于北京中山生物技术有限公司。1.2.2免疫组化方法 常规脱蜡水化，采用链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶法，均经柠檬酸缓冲液高压抗原热修复预处理，经显色，苏木素复染。用已知阳性的癌组织切片做阳性对照，代替一抗作阴性对照。脱蜡及水化：

1.3结果判定

Survivin阳性：胆管细胞浆或核呈棕黄色细颗粒：Caspase-3阳性：胆管细胞浆呈棕黄色颗粒。采用半定量积分法：每项指标随机选取10个高倍视野，阳性细胞数≤10%为阴性（-）；11%～25%为弱阳性（+）；26%～50%为中等阳性（++）；＞50%为强阳性（+++）；后三者视为阳性［6］。

1.4统计学处理

应用SPSS13.0统计学软件进行数据分析，其中计数资料采用四格表χ2检验，计量资料以均数±标准差（）表示，采用t检验，检验水准 α=0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的阳性表达情况

见表1。Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的阳性率分别为75.0%、40.0%，Survivin与Caspase-3在胆管癌的癌旁组织中的阳性率率分别为3.3%、80.0%，Survivin与Caspase-3在正常组织中的阳性率率分别为0、90.0%。其中Survivin在A组中的阳性率显著高于B组、C组，差异有统计学意义（χ2=4.398、4.562，P＜0.05）。而Caspase-3在在A组中的阳性率低于B组、C组，差异有统计学意义（χ2=5.238、5.142，P＜0.05）。但Survivin和Caspase-3在B组、C组中的阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=0.334、0.762，P＞0.05）。

表1　Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的阳性表达情况［%（n/n）］

2.2Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的表达及与临床病理因素间的关系

见表2。Survivin、Caspase-3在胆管细胞癌中的表达与分化程度及淋巴结转移有密切关系，差异有统计学意义（P＜0.05）。而与患者的年龄无关（P＞0.05）。

2.3胆管细胞癌中Survivin与Caspase-3表达的相关性分析

见表3。胆管细胞癌中Survivin阳性30例，Caspase-3阳性16例，二者均为阳性7例，二者均为阴性1例，应用相关分析显示，Survivin在胆管细胞癌中的表达与Caspase-3呈负相关（r=-0.723，P＜0.05）。

表2　Survivin与Caspase-3在胆管细胞癌中的表达及与临床病理因素间的关系

表3　胆管细胞癌中Survivin与Caspase-3表达的相关性分析（n）

3　讨论

胆管细胞癌的发生是多因素参与、多步骤、多阶段的过程。研究发现，胆管细胞癌解剖位置特殊，恶性度高，且起病隐匿，预后差，与肝细胞肝癌相比更容易发生早期淋巴结转移与术后复发。近年来有数据表明：胆管细胞癌的发病率和死亡率逐年增高［7］。

Survivin是新近发现的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）基因家族的新成员。Survivin的表达具有高度特异性，在胚胎组织高表达，而在正常成体组织，除了胎盘和胸腺之外，几乎检测不到［8］。在胆管细胞癌的发生发展过程中，Survivin基因处在细胞凋亡和细胞分裂的交叉路口，可以同时控制这两个在肿瘤发病中重要的细胞生命活动过程［8］。目前已有研究者［9-15］证实Survivin参与了多种人类肿瘤如肺、胃癌、食管癌［5］、膀胱癌、肝细胞癌、宫颈癌等的发生，但是目前国内外对其与胆管细胞癌关系的研究较少。本研究应用免疫组化方法检测40例胆管细胞癌中Survivin的表达，结果显示，Survivin在胆管细胞癌中的阳性率达75.0%，显著高于癌旁组织和正常组织（P＜0.05）且Survivin在胆管细胞癌中的表达与分化程度及淋巴结转移密切相关（P＜0.05）。与石晓岩等［16］报道的观点是一致的，说明Survivin参与了胆管细胞癌的发生发展过程，极有可能在胆管上皮出现异常增生和分化时就已表现出活性。Caspase-3是细胞凋亡通路中最重要的执行分子，是凋亡级联反应的最终效应蛋白，被认为是各种凋亡刺激因子激活的关键酶［17］。正常状况下，胞质中的Caspase-3无活性，当细胞接受凋亡刺激时，它被系列反应激活，进而诱导细胞发生凋亡［5］。有研究证实Caspase-3与胃癌的发生、发展密切相关，是肿瘤恶性转移的重要原因［8］。

本研究中，Caspase-3在胆管细胞癌中阳性率40.0%，低于癌旁组织和正常组织（P＜0.05）。且Caspase-3在胆管细胞癌中的表达与分化程度及淋巴结转移有密切关系（P＜0.05），说明 Caspase-3的表达与胆管细胞癌的发生、发展密切相关，Caspase-3在胆管细胞癌中的低表达促进了胆管癌细胞的增殖，阻碍了其凋亡［19-21］。本研究同时对二者在胆管细胞癌中的相关性进行分析，结果显示，Survivin在胆管细胞癌中的表达与Caspase-3呈负相关（r=-0.723，P＜0.05），说明Survivin和Caspase-3可能共同参与了胆管细胞癌的过程，Survivin是Caspase-3的直接抑制剂，通过抑制Caspase-3的活性而阻断各种刺激诱导的凋亡过程［22-24］。许鹏等［25］也证实了上述观点。

综上，Survivin在胆管细胞癌中的阳性表达率较高，但Caspase-3较低，二者呈负相关，考虑可能是Survivin抑制了Caspase-3介导的细胞凋亡，对Survivin 与Caspase-3的研究有助于深入了解胆管细胞癌的发生、发展机制。

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ExPression and correlation of Survivin and CasPase-3 in cholangiocarcinoma

LI Yangjun1ZHANG Wei2
1.Department of Minima11y Invasive Surgery，Ningbo No.2 Hospita1，Ningbo315010，China；2.Department of Gastroentero1ogy，Ningbo No.2 Hospita1，Ningbo315010，China

R735.8

A

1673-97O1（2O16）11-OO13-O4

浙江省宁波市第二批科技项目（2012A610198）

2016-01-28）