王欢　方煌　李潇　高书涛　周传坤　邹银双　李锋

人诱导性多能干细胞的无饲养层培养及鉴定

王欢方煌李潇高书涛周传坤邹银双李锋

目的探索人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）的无饲养层培养方法，并对此方法培养的iPSCs进行鉴定。方法将人iPSCs接种于玻璃粘连蛋白（Vitronectin XF）包被的培养皿上培养，采用EDTA消化传代。倒置显微镜下观察iPSCs的生长状态；碱性磷酸酶（ALP）染色鉴定；采用PCR和免疫荧光检测iPSCs多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2的表达情况。结果倒置显微镜下可见iPSCs呈典型的克隆状生长，克隆呈圆形或椭圆形，边界清晰、整齐；ALP染色结果阳性；PCR结果显示人iPSCs强表达多能性基因SSEA-1、Nanog、Sox2；免疫荧光结果显示多能干细胞特异性指标SSEA-1、Nanog、Sox2均呈阳性。结论无饲养层培养体系培养人iPSCs，细胞能稳定增殖，保持自我更新潜能及多能性。

多能干细胞；细胞培养技术；无饲养层

人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）是一种借助重编程技术获得的多能干细胞［1，2］，不仅具有类似于胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESC）的增殖能力和多能性［3］，可被诱导分化为运动神经元、少突胶质细胞、心肌细胞等［4-6］，而且还规避了ESC及成体干细胞面临的伦理道德、法律、难以大量获取等问题，具有更广阔的应用前景［7］。由于iPSCs的饲养层培养法面临步骤繁琐、工作量大、细胞纯化困难等问题，且未达到临床应用的要求［8］，因此简单易行的无饲养层培养法更为实用。

本研究采用无饲养层iPSCs培养体系建立人iPSCs系，并对获得的iPSCs进行鉴定，从而为iPSCs的基础研究及临床应用奠定基础。

材料与方法

一、实验材料

1.细胞：人iPSCs购自于北京赛贝生物技术有限公司。……