谢海坤，焦　健，樊秀彩，张　颖，姜建福，孙海生，刘崇怀

(中国农业科学院郑州果树研究所，郑州450009)



中国野生葡萄叶绿体分离及叶绿体DNA提取的研究

谢海坤，焦健，樊秀彩，张颖，姜建福，孙海生，刘崇怀*

(中国农业科学院郑州果树研究所，郑州450009)

以中国野生刺葡萄、山葡萄、桑叶葡萄和东南葡萄的成熟叶片为材料，比较柱式植物叶绿体DNAout试剂盒和改良的高盐-低pH法分离叶绿体及提取cpDNA效果。结果显示：(1)2种方法均分离得到了中国野生葡萄的叶绿体，但与柱式植物叶绿体DNAout试剂盒相比，改良的高盐-低pH法得到的叶绿体浓度高、杂质少，更适合中国野生葡萄叶绿体分离。(2)柱式植物叶绿体DNAout试剂盒提取的cpDNA，其OD260/OD280在1.28～1.36之间，质量浓度为4.2～7.8 ng·μL-1，质量低，不能满足后续测序要求；而改良的高盐-低pH法提取的cpDNA，其OD260/OD280值在1.84～1.90之间，质量浓度为2 514.4～4 133.7 ng·μL-1，质量高，纯度好，能满足后续测序要求。研究表明，改良的高盐-低pH法能简便、快速获得中国野生葡萄完整叶绿体及高质量cpDNA，并且提取的cpDNA可满足后续测序要求，为葡萄属植物叶绿体基因组的深入研究奠定了基础。

中国野生葡萄；叶绿体分离；cpDNA提取；柱式植物叶绿体DNAout；改良的高盐-低pH法

叶绿体是植物进行光合作用的重要细胞器，具有相对独立的遗传物质(cpDNA)。cpDNA一般长120 160 kb[1]，多数是共价闭合双链分子，少数为线状分子。叶绿体基因组由4部分组成，大单拷贝区(LSC)、小单拷贝区(SSC)和2个反向重复序列(IRs)。叶绿体基因组序列高度保守，且属于母系遗传，后代遗传稳定，已在遗传结构分析[2]、分子标记[3]、核质互作和叶绿体基因工程[4]、起源演化[5]等领域开展了广泛研究。……