杨宝伟

(黑龙江省哈尔滨市呼兰区第四中学，哈尔滨 150500)

0 前言

自1880年，法国植物学家席姆佩尔发现植物叶绿体以来，人们对叶绿体的研究从未止步。自然界中植物通过叶绿体进行光合作用，而光合作用就是将二氧化碳和水转化为糖类，储存能量释放氧气。因此，光合作用几乎是植物生长不可或缺自然界不可或缺的过程。分子生物学的进步大大促进了植物叶绿体的研究水平。1960年人们发现叶绿体DNA(chloroplast DNA,cpDNA)。 它们是由具有光合作用的蓝细菌通过十亿年前的内分泌事件演化而来。叶绿体不仅能够进行光合作用，还参与完成了氨基酸、核苷酸、蛋白质等物质的代谢活动。其后，科研工作者1986年首次报道了烟草中叶绿体的全基因组序列。到目前为止已经完成了400种以上的植物叶绿体全基因组测序。开展植物叶绿体基因组分子生物学等方面的研究，前提就是分离出高质量的叶绿体。分离植物叶绿体常用的方法有3种：蔗糖密度梯度离心法、Percoll密度梯度离心法和高盐-低pH 法。本研究高盐-低pH 法探究甜菜叶绿体的分离提取方法，为深入了解甘薯叶绿体基因组、分析挖掘相关基因等研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料处理

以工大甜单1号为材料，材料种植于哈工大甜菜功能基因组实验室育苗中心，再4对真叶期，室温下暗处理3-4 d，充分消耗叶片中的淀粉多糖等，减少其对叶绿体分离的影响。

1.2 高盐-低pH法叶绿素提取

取甜菜叶片20-30 g加入缓冲液 A：1.25 mol/L NaCI，20 mmol/L EDTA-Na2，50 mmol/L Tris-HCI(Ph 8.0)，0.25 mol/L Vc，1 mmol/L DTT,0.1% BSA。匀浆处理，低速匀浆3～5次，高速匀浆3～5次，每次6～10 s。……