申苏建，郑波，蔡振寨，徐昌隆，薛战雄

·论著·

抗CD71单抗与蓖麻毒蛋白A链免疫毒素的制备及其体外抗肝癌细胞效应的研究

申苏建，郑波，蔡振寨，徐昌隆，薛战雄

目的因抗CD71单抗具有靶向定位特性，及利用蓖麻毒蛋白A链（RTA）的细胞毒性，将两者进行偶联，构建免疫毒素CD71 Mab-RTA，并研究其体外抗肝癌细胞效应。方法从蓖麻籽中提纯RTA，以N-琥珀酰胺-3（-2-吡啶二硫）丙酸酯［N-succinimidyl-3（-2-pyridyldithio）-propionate，SPDP］作为偶联剂，偶联抗CD71单抗，构建免疫毒素（IT），以SDS-PAGE检测IT，以间接ELISA方法测定IT的免疫反应性，以WST-1法测定IT的体外抗肝癌细胞效应。结果蓖麻籽经过研磨、过滤、亲和层析、凝胶层析、离子交换层析等步骤成功提纯RTA。提纯的RTA与CD71mab进行偶联，成功构建免疫毒素CD71 Mab-RTA，SDS-PAGE结果显示，在非还原状态下，为一条分子量＞116 kD的单一电泳条带，在还原状态下，为三条电泳条带，分别位于约55 kD处、约32 kD处及约28 kD处。间接ELISA结果显示，免疫毒素与单抗的曲线走势一致，但各浓度下OD值均较单抗组略低。WST-1结果显示，IT在各浓度梯度下均表现出对HepG2细胞和LO2细胞不同的杀伤作用（＜0.05）。结论CD71 mab-RTA基本保留了免疫反应性，及表现出对HepG2细胞和LO2细胞的不同体外细胞毒效应，提示对肝癌细胞具有较好的靶向细胞毒作用，有望成为新型的抗肝癌药物。

肝肿瘤；癌；免疫毒素；蓖麻毒蛋白；CD71

[Modern FracicalMedicine， 2016，28（7）：847-850]

1　资料与方法

1.1仪器、试剂与细胞株蓖麻籽（浙江可得丰种业有限公司）；UV-2800型紫外可见分光光度计（尤尼柯仪器有限公司）；SPDP（sigma公司）；sepharose 4B、sephadex G-100、DEAE-Sephadex A-50、CM-sephadex C-50、sephadex G-25、sephadex G-150、Blue-sepharose CL-6B（Amershan Bioscience公司）；D-半乳糖、DTT、-巯基乙醇（西安沃尔森生物技术有限公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；……