张长风，于　魁，朱丽华，李淑英



携带BARF1基因的重组巨细胞病毒的构建

张长风1，2，于魁2，朱丽华2，李淑英2

目的依据细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)能够克隆大段DNA病毒的特点，通过galk为基础的同源重组，将EB病毒编码BARF1基因插入巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV),构建重组病毒。方法PCR扩增带有巨细胞病毒UL57基因左右同源臂的galk及BARF1基因片段，经过电转化，进行同源重组，经含有galk培养基及脱galk培养基筛选，获得带有BARF1的巨细胞病毒细菌人工染色体克隆，提取质粒，转染到ARPE-19细胞,观察带有BARF1基因的巨细胞病毒对ARPE-19细胞的影响。结果感染带有BARF1基因的巨细胞病毒的ARPE-19细胞形态由原来的长梭形变为变圆、肿胀、胞浆颗粒增多，并且细胞生长失去接触抑制，出现重叠生长现象。结论建立了携带BARF1基因的重组巨细胞病毒;同时表明利用细菌人工染色体,可方便地对病毒基因组进行准确操作。

同源重组；电转化；细菌人工染色体

细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)的发展，是DNA病毒基因结构、功能及疫苗研究领域的一项重大突破。利用细菌人工染色体进行克隆，病毒能够在细菌细胞内稳定传播，也能在细菌细胞内进行同源重组；并且病毒细菌人工染色体中，任何要求的基因重组或突变，都能够迅速容易地实现，这种基因改变能在病毒重组前加以验证，因此，细菌人工染色体的建立为重组病毒的构建、病毒基因功能的研究带来了极大的方便[1-5]。本项研究利用人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)的细菌人工染色体能够克隆大段DNA病毒的特点，通过以galk为基础的同源重组，将EB病毒编码BARF1基因插入HCMV,构建重组病毒。……