安贵峰　王明月

【摘要】 目的 探讨骨矿化蛋白LMP-3促进骨形成及骨修复重建的分子机制。方法 通过腺病毒LMP-3表达载体转染骨髓间充质干细胞， RT-PCR法检测LMP-3、BMP-2、OSX表达变化， 检测相关因子表达情况。结果 腺病毒LMP-3表达载体转染骨髓基质干细胞， 发现BMP-2 mRNA、OSX mRNA的表达增高， 促进骨形成。结论 LMP-3作用机制是通过上调BMP、OSX等骨诱导因子的基因表达， 促进成骨细胞分化成熟， 从而促进骨形成， LMP在骨形成研究方面具有一定潜力。

【关键词】 LMP-3， 骨髓基质干细胞；表达情况

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.22.207

LMP作为一种新发现的骨矿化蛋白， 为骨组织工程及骨科重建提供新的途径。研究者应用腺病毒LMP-3表达载体转染骨髓基质干细胞， 检测BMP-2 mRNA、OSX mRNA的表达情况， 探讨骨矿化蛋白LMP-3促进骨形成的可能机制。现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 主要试剂：PCR引物（上海生物）；兔抗大鼠LMP-3抗体（Santa Cruz） ；二抗羊抗鼠FITC标记IgG（中杉金桥）；胰酶（GIBCO）；RT-PCR试剂盒（Takara）；胎牛血清（HYCLONE）；DMEM（HYCLONE）；引物（上海生工）；质粒抽提试剂；MSC 诱导药物（Sigma）；腺病毒LMP-3表达载体前期自行构建。主要仪器：超净工作台（苏净）；恒温CO2孵箱（Hera Cell ）；倒置显微镜（日本 Olympus）；荧光显微镜（Olympus）；PCR仪（Bio-Rad）；垂直电泳仪（Bio-Rad）；转印电泳仪（Amersham）；可调温摇床（哈尔滨东联）；台式低温离心机（Eppendorf公司）；酶标仪（芬兰雷勃）。

1. 2 实验方法

1. 2. 1 骨髓基质干细胞培养 取3周龄SD大鼠， 处死， 取股骨和胫骨， 注入PBS， 离心管收集， 250×g， 离心10 min， 加入100 g/L 高糖DMEM 10 ml。接种于2 个25 cm2 培养瓶中， 培养箱中培养；48 h换液， 10 d 后细胞80%汇合， 胰蛋白酶消化传代， 继续培养， 培养箱中培养。

1. 2. 2 实验组感染复数（MOI=100）；对照组：未加病毒转染作为阴性对照组， LacZ 转染组作为阳性对照。

1. 2. 3 转染过程 将第……