李原，李凡（.浙江省医疗器械研究所，杭州 30009； .浙江省药品认证检查中心，杭州 30009）



毛细管气相色谱法测定医用可吸收结扎夹单体乙交酯

李原1，李凡2
（1.浙江省医疗器械研究所，杭州 310009； 2.浙江省药品认证检查中心，杭州 310009）

建立内标-气相色谱法定性定量分析医用可吸收结扎夹中乙交酯单体残留的方法。以六氟异丙醇为溶剂，在磁力搅拌下充分溶解样品。采用HP-5毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）为分离柱，检测器为FID。进样口温度为180℃，检测器温度为300℃；采用程序升温，起始温度为80℃，以10℃/min升至170℃，保持2 min。在选择的色谱条件下，乙交酯和内标物癸内酯得到良好的分离。乙交酯线性范围为0.03～0.15 mg/mL，线性相关系数r=0.999 1，检出限为0.903 µg/mL。测定结果的相对标准偏差为1.06%（n=6），加标回收率为92.5%～112.7%。该方法样品前处理简单，重现性好，分离效率高，可作为医用可吸收结扎夹残留乙交酯单体的质量控制方法。

毛细管气相色谱法；乙交酯；可吸收结扎夹；癸内酯

可吸收结扎夹与施夹钳配套使用，在临床上主要用于腹腔镜胆囊切除术，随着科技的发展和进步，可吸收结扎夹会逐渐取代腹部手术及妇产科手术中常用的金属钛夹，避免由于金属钛夹对血管组织的损坏，且其生物相容性更优，减少了术后局部炎症反应、瘢痕形成等风险。另外，可吸收结扎夹具有使用方便，结构简单，容易清洗、消毒等特点［1-8］，但作为一种新型高科技产品应用于临床的长期作用尚需进一歩观察。可吸收结扎夹一般由人工合成可吸收聚脂材料制成，合成工艺多以乙交酯单体为原料经开环聚合制得［9］，例如聚乙交酯（PGA），又名聚羟基乙酸，是一种高结晶、可生物降解的脂肪族聚合物，降解速度快，主要用于可吸收结扎夹、手术缝合线等领域。但PGA样品可能残存未反应完全的乙交酯，虽然乙交酯本身无毒性，但其在PGA中的残留会影响PGA的缓控释效果［10］，故需对其单体残留量加以检测和控制。目前，测定交酯类单体的方法主要有氢核磁法、光度法、红外光谱法和气相色谱法［11-15］，其中氢核磁法、光度法、红外法均很难准确定量，因此各实验室采用比较少，近几年来气相色谱法用于交酯类单体含量测定的相关报道比较多。

目前尚无医疗器械用可吸收结扎夹生物材料中残留单体的分析方法及限量值，笔者结合相关报道优化了气相色谱测试条件，采用内标法定量，消除系统误差、仪器误差、操作误差等，建立了一种可用于PGA中残留单体测定的毛细管气相色谱法，该方法样品中被检测成分分离效果好，灵敏度高，受干扰程度小，精密度、准确度满足检测要求。

1　实验部分

1.1主要仪器与试剂

气相色谱仪：Agilent 7890A型，配有氢火焰离子化检测器（FID）和ALS Chemstation色谱工作站，美国安捷伦科技公司；

离心机：DL-5-B型，上海安亭科学仪器厂；

恒温水浴：HH-2型，常州国华电气有限公司；

电子天平：BSA224S型，分度值为0.1 mg，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；

六氟异丙醇：色谱纯，美国TEDIA试剂公司；

乙交酯：纯度为99.5%，玛雅试剂有限公司（中国）；

癸内酯：色谱级，玛雅试剂有限公司（中国）；

实验用水为MilliQ超纯水。

1.2溶液配制

乙交酯储备液：3 mg/mL，取外部干燥的10 mL容量瓶两个，加超纯水数毫升，称量，准确至0.1 mg。加入约30 mg乙交酯，精密称量，前后两次称量之差，即为乙交酯质量，加超纯水至标线，混匀。

内标溶液：称取癸内酯约45 mg，精密称量，置于25 mL容量瓶中，加入六氟异丙醇溶解并定量稀释至标线。

乙交酯对照品溶液：0.15 mg/mL，精密移取5 mL乙交酯储备溶液，置于100 mL容量瓶中，精密加入2 mL癸内酯内标溶液，用六氟异丙醇溶剂稀释至标线。

1.3样品处理

精确称量100 mg可吸收结扎夹外夹检测样品置于10 mL容量瓶中，加入搅拌棒并加入六氟异丙醇至容量瓶容积的90%，充分搅拌使样品完全溶解。然后加入200 μL内标溶液，用第二磁体将搅拌棒提到刻度线以上，再用六氟异丙醇溶剂定容至标线，将搅拌棒下降到溶液中充分搅拌均匀。

1.4色谱条件

色谱柱：HP-5 毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美国安捷伦科技公司）；色谱柱进样口温度：180℃；分流比：30∶1；样品流速：2.0 mL/min；升温程序：起始温度为80℃，以10℃/min升至170℃，保持2 min；检测器温度：300℃；H2流量：30.0 mL/min；压缩空气流量：400 mL/min；氮气补气流量：35 mg/mL；进样体积：1 µL。

2　结果与讨论

2.1内标物的选择

分别以乙酰乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、癸内酯为内标物进行考察试验。结果显示，以乙酰乙酸为内标物时，其内标色谱峰拖尾因子过大；以乙酸乙酯及乙酸丁酯为内标物时，分离度不理想；以癸内酯为内标物时，各项指标均符合要求，故选择癸内酯为内标物。

2.2色谱柱及升温速率的选择

对HP-5，DB-WAX，HP-INNOWAX毛细管柱进行试验，结果显示，HP-5柱［填料为（5%苯基）甲基聚硅氧烷］温度上限较高，可用溶剂进行冲洗，用于非极性乙交酯的测试，峰型好，且分离度大于2.0，因此试验选择HP-5毛细管柱。

毛细管柱采用程序升温，选择升温速率5，10，20，30℃/min进行试验。结果表明，升温速率越高，杂质峰重合越明显；随着升温速率降低峰型逐渐变宽，当升温速率为10℃/min时，分离度符合要求，且峰型较好，因此实验选择升温速率为10℃/min。

2.3系统适用性考察

取对照品溶液、某吸收结扎夹（批号为14036070）样品制备的供试品溶液及六氟异丙醇溶剂，按1.4色谱条件分别进样分析，色谱图见图1、图2。试验结果表明，乙交酯在2.74 min出峰，分离度k=2.32；癸内酯在6.79 min出峰，分离度k=7.25，理论塔板数达到100 000以上。可见内标物癸内酯、残留单体乙交酯能得到有效分离，而且六氟异丙醇不干扰乙交酯的测定。

2.4方法学验证

2.4.1线性方程、线性范围及检出限

精密吸取乙交酯对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，分别置于5个10 mL容量瓶中，用六氟异丙醇定容至标线，得到质量浓度分别为0.03，0.06，0.09，0.12，0.15 mg/mL的系列标准工作溶液，分别在1.4条件下进行气相色谱分析。以乙交酯的质量浓度（X ）为横坐标，以对应的色谱峰面积（Y ）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=0.062 1X+0.039，线性相关系数r=0.999 1，线性范围为0.03～0.15 mg/mL。

图2　供试品溶液气相色谱图

以基线噪声的3倍对应待测物浓度作为方法的检出限，得检出限DL=0.903 µg/mL；以5倍检出限作为方法定量下限，MDL=4.515 µg/mL。

2.4.2精密度试验

配制乙交酯对照溶液120 µg/mL，按1.4条件进行色谱分析，连续进样测定6次；同一标准溶液，每天分别进样1次，连续6 d。依据2.4.1校准曲线计算实际测定值，得实验精密度及日间重复性（RSD）分别为1.06%，1.38%，见表1，结果表明方法精密度良好。

表1　精密度及日间重复性试验结果（n=6）

2.4.3回收试验

精确称取50 mg可吸收结扎夹外夹样品，置于10 mL容量瓶中，按照1.3方法进行样品处理，得到样品溶液，按实验方法进行测定。然后加入不同量的乙交酯对照品溶液，进行加标回收试验，每一浓度连续测定6次，结果见表2。由表2可知，加标回收率为92.5%～112.7%，说明方法的准确度较高。

表2　回收试验结果（n=6）

3　结语

采用毛细管气相色谱法测定医用结扎夹外夹中残留单体乙交酯的含量。在选择的色谱条件下，内标物与残留单体均能有效分离，色谱系统的精密度、重现性、稳定性好，且专属性强，该方法适宜长期对可吸收结扎夹进行质量控制。

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Determination of Glycolide Monomer in Medical Absorbable Ligating Clip by Capillaty Gas Chromatography

Li Yuan1， Li Fan2
（1. Zhejiang Institute for the Research of Medical Device， Hangzhou 310009， China；2. Zhejiang Center for Drug Certification and Inspection， Hangzhou 310009， China）

The determination of glycolide monomer in medical absorbable ligating clip by capillaty gas chromatography was established. The sample was dissolved by magnetic stirring，with hexafluoroisopropanol as solvent，HP-5 column （30 m×0.32 mm，0.25 µm） and FID were used. The injector temperature was 180℃， FID temperature was 300℃. Column temperature programming: initial temperature was at 80℃， then increased to 170℃ at 10℃/min for 2 minute. Under the selected chromatographic conditions，glycolide and decalactone could get good separation. The linear range of glycolide was 0.03-0.15 mg/mL， correlation coefficient was 0.999 1， and the detection limit was 0.903 µg/mL. The relative standard deviation of detection results was 1.06%（n=6）， standard addition recovery was 92.5%-112.7%. This method is simple in sample tratement，has good reproducibility and high separation efficency， it can be used for mass control of glycolide monomer in medical absorbable ligating clip.

capillaty gas chromatography； glycolide； absorbable ligating clip； decalactone

O657.7

A

1008-6145（2016）04-0069-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.04.018

联系人：李原；E-mail: fancyzl11@163.com

2016-04-28