Lipofectamine2000转染pSiRNA-STAT3质粒对脑神经胶质瘤C6细胞的作用
2016-08-15周翔宇周庆伟
周翔宇 田 琳 周 悦 戴 乐 刘 爽 周庆伟
(吉林大学中日联谊医院,吉林 长春 130033)
Lipofectamine2000转染pSiRNA-STAT3质粒对脑神经胶质瘤C6细胞的作用
周翔宇田琳1周悦2戴乐刘爽1周庆伟1
(吉林大学中日联谊医院,吉林长春130033)
目的研究Lipofectamine2000下转染pSiRNA-STAT3质粒对脑神经细胞C6的作用。方法取对数生长期的C6细胞随机分为Mack组、Scramble组和pSiRNA-STAT3组采用MTT法检测C6细胞在不同时间段(6、8、10 h)细胞增殖活性;荧光显微镜观察吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)检测细胞凋亡及线粒体膜电位变化。结果Lipo2000转染pSiRNA-STAT3质粒在8 h时对C6细胞具有明显的抑制作用;镜下观察pSiRNA-STAT3组可见典型的细胞凋亡形态学特征性改变;线粒体膜电位显著降低。Mock组与Scramble组比较无统计学意义(P>0.05);pSiRNA-STAT3组与Scramble组比较差异显著(P<0.05)。结论Lipo2000 转染pSiRNA-STAT3质粒可能通过降低线粒体膜电位,抑制肿瘤细胞增殖并促进细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长的作用。
pSiRNA-STAT3质粒;神经胶质瘤C6细胞;细胞凋亡;线粒体膜电位
神经胶质瘤的发病机制尚未十分清楚,研究显示,神经胶质瘤的发生、发展与细胞凋亡密切相关〔1~3〕。传统的治疗原则是术后先放疗后化疗或单独放疗/化疗,但都难以提高其临床疗效〔4〕。研究已证明,利用小干扰 RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)或小分子抑制剂调低 STAT3蛋白的表达具有抗肿瘤作用〔5~7〕。因此,STAT3可作为恶性肿瘤的预后指标和治疗靶点。本实验旨在研究Lipofectamine 2000 c Lipo2000,转染pSiRNA-STAT3质粒对脑神经胶质瘤C6细胞作用的影响。
1 材料与方法
1.1材料脑神经胶质C6细胞株:购自中国科学院上海细胞生物学研究所;主要试剂:①Opti-MEM培养基(美国GIBCO公司产品,编号:1267487);②Lipofectamine2000转染试剂(美国,编号:1345247,);③线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1,编号:C2006)。主要药品:①溴乙啶(EB,美国Sigma公司,批号:E8751);②吖啶橙(AO,中国北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司,批号:1AB10220);③……
