张俊士　王　琼　贺维亚　赵雪艳

(河南大学淮河医院神经内科，河南　开封　475000)



维甲酸通过抑制沉默调节因子1诱导P19细胞分化为神经细胞的机制

张俊士王琼贺维亚赵雪艳

(河南大学淮河医院神经内科，河南开封475000)

目的探讨维甲酸(RA)诱导P19向神经分化的潜在分子机制。方法适当浓度RA诱导P19细胞4 d，观察是否有神经细胞标志物β-Tubulin产生，同时观察对SIRT1和Notch1的影响。RT-PCR和Western印迹实验检测敲低SIRT1对β-Tubulin和Notch1的影响。Western印迹实验检测高表达Notch1是否对β-Tubulin表达水平产生影响。结果RA诱导P19细胞4 d内β-Tubulin表达水平逐渐升高，SIRT1和Notch1表达水平明显降低，表明RA在4 d内能够明显地刺激P19细胞向神经细胞方向分化，并能够抑制SIRT1和Notch1信号通路。敲低SIRT1后，与对照组比较诱导分化4 d后神经分化标志物β-Tubulin水平升高，Notch1水平下降。高表达Notch1组在诱导神经分化4 d后β-Tubulin水平相对较低。结论RA可能通过降低SIRT1而抑制Notch1信号通路，促使P19细胞向神经分化。

维甲酸；P19细胞；神经分化；SIRT1；Notch1

小鼠胚胎性癌细胞P19是McBurney等〔1〕从C3H/He雄性小鼠睾丸畸胎瘤中分离出来的，体外常用于探究胚胎分化发育分子机制。在设定浓度的全反式维甲酸(RA)的刺激下，P19细胞能够向多种类型的神经元和神经胶质细胞方向分化。沉默调节因子(SIRT)1在胚胎发育过程中起到重要作用〔2〕。Notch1信号通路对神经干细胞的分化起调控作用，Notch1上调对细胞分化起抑制作用，而下调则促进其分化〔3〕。本实验通过RA处理诱导P19细胞向神经分化，观察诱导的前4 d SIRT1和Notch1表达的变化，探讨SIRT1和Notch1是否参与RA诱导P19细胞向神经分化的过程。

1　材料和方法

1.1细胞及主要试剂P19细胞购于美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection)。……