杨小燕，何志旭,2△，舒莉萍，金　皎，黄　璟，吴莎莎，马健娟

(1.贵州医科大学附属医院儿科　550004；2.贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心　550004；3.贵州医科大学免疫学教研室，贵阳 550004)



Rap1基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中的时空表达谱研究*

杨小燕1，何志旭1,2△，舒莉萍2,3，金皎1，黄璟1，吴莎莎1，马健娟1

(1.贵州医科大学附属医院儿科550004；2.贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心550004；3.贵州医科大学免疫学教研室，贵阳 550004)

目的选择斑马鱼作为实验动物模型，研究Rap1基因在胚胎早期发育过程中的时空表达规律。方法从斑马鱼胚胎cDNA中克隆Rap1基因片段，将Rap1基因片段和pCS2+质粒进行体外连接重组，重组质粒经双酶切、菌落聚合酶链反应(PCR)及测序鉴定正确后，经T3RNA体外转录体系合成DIG标记的Rap1基因反义mRNA探针，采用整胚原位杂交方法检测Rap1在斑马鱼胚胎早期发育过程的表达情况。结果在斑马鱼胚胎0.75 hpf的细胞分裂连接处、3.70 hpf和6.00 hpf的动物极、12.00～72.00 hpf的脊索神经部位均可见Rap1基因的阳性杂交信号。结论Rap1基因在斑马鱼脊索神经系统的早期发育过程中可能起到重要的调控作用。

Rap1基因；斑马鱼；原位杂交；基因表达

Rap1又称Ras相关GTP结合蛋白，是Kitayama在筛选NIH/3细胞中抑制Ras蛋白转化功能的蛋白分子过程中发现的。Rap1的两个亚型：Rap1a和Rap1b在氨基酸序列上具有超过90%的同源性，且与Ras蛋白有高度同源性。Rap1和其他G蛋白一样，表现为无活性的GDP结合形式和有活性的GTP结合形式两种构象[1-2]。最初的研究认为Rap1主要是通过直接与Ras的下游效应子相互作用来干扰Ras信号通路，但最近更多的研究结果表明Rap1是一个功能独立的信号通路,通过控制不同的信号通路参与调节细胞的粘连、细胞间连接形成、细胞极性和细胞的增殖与分化[3-4]。……