李健春，王　丽，姜　宁，王　琼△

(1.西南医科大学药学院，四川泸州 646000；2.中西医结合防治器官纤维化实验室/中西医结合研究中心/西南医科大学附属中医医院，四川泸州 646000)



脑源性神经营养因子原核表达载体的构建及其生物学活性分析*

李健春1,2，王丽2，姜宁1，王琼1△

(1.西南医科大学药学院，四川泸州 646000；2.中西医结合防治器官纤维化实验室/中西医结合研究中心/西南医科大学附属中医医院，四川泸州 646000)

目的构建含有脑源性神经营养因子(BDNF)的原核表达质粒pET28a(+)/BDNF及相应的原核表达菌，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后研究其生物学活性。方法按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化，人工合成大鼠BDNF的基因序列并构建原核表达质粒pET28a(+)/BDNF。经限制性内切酶(Bam HI,Hind Ⅲ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导表达后，用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况，以BDNF特异性抗体采用Western blot法鉴定BDNF蛋白抗原性，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测BDNF蛋白对PC12细胞活力的影响。结果构建的pET28a(+)/BDNF经双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致；工程菌经IPTG诱导后在相对分子质量17×103左右有1条明显蛋白条带，Western blot显示目的蛋白能够与特异性BDNF抗体反应；不同浓度BDNF蛋白处理组与对照组比较细胞活力均有不同程度的增加，其中50 ng/mL BDNF处理组效果最优。结论成功构建原核表达质粒pET28a(+)/BDNF及相应的原核表达菌，该工程菌表达的BDNF蛋白具有良好的生物学活性。

脑源性神经营养因子；原核表达；生物学活性

脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)最初是由Brade从猪脑中分离、纯化的一种碱性蛋白质[1]。……