覃鸿妮， 张兰兰

(1.苏州工业园区服务外包职业学院,江苏苏州 215123；2.金唯智(苏州)生物科技有限公司，江苏苏州 215123)



载体浓度和感受态对大分子载体转化效率的影响

覃鸿妮1， 张兰兰2

(1.苏州工业园区服务外包职业学院,江苏苏州 215123；2.金唯智(苏州)生物科技有限公司，江苏苏州 215123)

[目的]研究载体量和感受态对阳性克隆率的影响。[方法]利用引物拼接PCR技术，自行设计26条引物合成一个835 bp的目的基因，将该基因与约20 kb的大分子载体连接构成重组质粒。在1 500 ng目的基因底物量的基础上，设置50、100、150、200、250、300 ng 6个梯度载体量，得到的重组反应产物再转化入Top10F′、DH5α、Stbl3、Epi400、JM108、SCSI 6种不同的感受态中， 组成36个试验组合。[结果] 不同载体量阳性克隆率由大到小依次为200、250、300、150、100、50 ng，200 ng的阳性克隆率最高可达75%，平均达28.5%。不同感受态细胞阳性克隆率由大到小依次为Stbl3、Top10F′、DH5α、JM108、Epi400、SCSI，Stbl3在任何载体浓度下均高于其他感受态，平均阳性克隆率为42.4%。[结论]载体量和感受态均明显影响阳性克隆率，最佳组合为200 ng的载体分子量配合Stbl3感受态，阳性克隆率可达75%。

大分子载体；载体浓度；感受态； 转化效率

质粒载体是细胞中具有自主复制能力的较小DNA分子，是基因工程中重组DNA 最常见的运载体，可以将目的DNA片段通过重组DNA技术，导入受体细胞中进行繁殖和表达[1-7]。质粒载体的DNA长度从数千碱基对到数十万碱基对不等，相对于分子量较小的载体，大分子载体在细胞外的重组连接效率低，在感受态中转化效率低，在宿主细胞内的拷贝率低，传代易产生目的DNA的随机突变和缺失，表达很不稳定[8-10]。……