任小丽，苏湘川，石青青，胡雅玉，陈祥恩，陈健（浙江省台州市立医院，台州318000）

Th17细胞及白细胞介素17A、17F对特应性皮炎患者病情的影响

任小丽，苏湘川，石青青，胡雅玉，陈祥恩，陈健
（浙江省台州市立医院，台州318000）

目的研究不同严重程度特应性皮炎患者Th17细胞及白细胞介素（IL）-17A、IL-17F的变化，探讨其在特应性皮炎发病中的作用。方法采用流式细胞术检测不同严重程度特应性皮炎患者外周血Th17细胞的比例，采用ELISA测定培养上清液中IL-17A、IL-17F表达水平，以健康成人作为对照。结果轻度AD患者与正常人比较，外周血Th17细胞比例、IL-17A水平增高（P＜0.05）；中度AD患者与正常人比较，外周血Th17细胞比例及IL-17A水平明显增高（P＜0.01）；重度AD患者与正常对照组比较，IL-17F水平增高（P＜0.05）；中度AD患者与轻度AD患者比较，外周血Th17细胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05）；重度AD患者与中度AD患者比较，外周血Th17细胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05）。结论Th17细胞及IL-17A、IL-17F可能在AD的发生及发展过程中发挥重要作用。

特应性皮炎；Th17细胞；白细胞介素-17A；白细胞介素-17F

特应性皮炎（Atopic dermatitis，AD）是一种慢性、复发性、瘙痒性皮肤病，严重影响患者的生活质量。本病发病原因复杂，可能与遗传、感染、环境因素及免疫功能障碍有关。目前AD的发病具体机制尚不清楚，有研究发现Th17细胞与AD的发病有关［1］，但不同严重程度的AD患者与Th17型细胞及其所分泌的细胞因子的相关性的报道少见。本研究对不同严重程度AD患者外周血Th17细胞比例及所分泌的细胞因子IL-17A、IL-17F的水平进行研究，进一步探讨AD的发病、发展与Th17细胞之间的关系。

1　资料与方法

1.1一般资料所选病例为2012年6月—2014 年10月就诊于台州市立医院皮肤科门诊AD患者98例，全部符合Williams特应性皮炎诊断标准［2］。所有病例在入选前停用抗组胺药1周以上，停用系统糖皮质激素及其他免疫抑制剂或光疗1个月以上。除外合并系统感染、免疫系统疾病、或肝、肾、造血系统和内分泌系统等严重原发性疾病和精神疾病的患者。其中38例不符合纳入标准，予以剔除，剩余60例符合纳入标准，作为试验组。病情严重程度按欧洲特应性皮炎评分标准（SCORAD）进行评分［3］，评分越高，病情越重，按分值从低到高分为3组，＜25分为轻度组，25～50分为中度组，＞50分为重度组。试验组患者中轻度21例，男13例，女8例，年龄2～19岁，平均（9.27±3.25）岁；中度20例，其中男12例，女8例，年龄3～21岁，平均（8.69±3.12）岁；重度19例，其中男12例，女7例，年龄1～20岁，平均（9.21±3.82）岁。正常对照组20例，均来自我院健康体检中心和儿内科门诊，其中男11例，女9例，年龄1～22岁，平均年龄（10.31±4.02岁）。各组AD患者及健康对照组性别、年龄差异无统计学意义。

1.2方法

1.2.1外周血单一核细胞（PMBC）的分离空腹采集各组受试对象外周静脉血5 mL，EDTA抗凝，Ficoll密度梯度离心法分离PBMC。

1.2.2外周血Th17细胞比例检测CD4+IL-17+T细胞/CD4+T细胞：将PBMC在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中调整至2×106细胞/mL，加入50 μg/L佛波酯、钙离子载体和布雷菲德菌素A共刺激培养5 h（37℃，5%CO2）；细胞膜异硫氰酸荧光素（FITC）-CD4单克隆抗体标记；透膜、固定后进行藻红蛋白（PE）-IL-17单克隆抗体胞内染色。winMDI2.9软件进行数据分析。

1.2.3IL-17A和IL-17F的检测将2 mL外周血1 500 r/min，离心5 min后，收集血清-80℃冰箱保存备用。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IL-17A和IL-17F水平，IL-17A和IL-17F试剂盒均由上海蓝基（BG）公司提供，操作步骤按照说明书进行，检测仪器为MK3-酶标仪（芬兰）。

1.4统计学处理采用SPSS16.0统计软件。计量资料以±s表示，多组间比较方差齐者采用LSD检验，方差不齐者采用Tamhane检验。

2　结果

与正常人比较，轻度、中度AD患者外周血Th17细胞比例及IL-17A水平均明显增高（P＜0.01）；重度AD患者与正常对照组比较，IL-17F水平增高（P＜0.05）；中度AD患者与轻度AD患者比较，外周血Th17细胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05）；重度AD患者与中度AD患者比较，外周血Th17细胞比例及IL-17A水平增高（P＜0.05），见表1。

3　讨论

表1　各组受试者外周血中Th17细胞比例及IL-17A、IL-17F水平比较　（s）

表1　各组受试者外周血中Th17细胞比例及IL-17A、IL-17F水平比较　（s）

注：与正常人对照比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与轻度AD患者比较△P＜0.05；与中度AD患者比较☆P＜0.05。

组别　nTh17细胞（%） IL-17A（pg/mL） IL-17F（pg/mL）健康对照组　20　1.31±0.33　10.23±1.85　4.65±0.38轻度AD组　21　2.15±0.45*　19.53±3.12*　5.25±0.85中度AD组　20　3.92±0.58**△　28.23±3.35**△　5.13±0.63重度AD组　19　5.22±0.74**△☆　41.17±6.37**△☆　7.89±0.81*

Th17细胞是近年发现不同于Th1、Th2的CD4+T细胞亚群，具有较强的促炎症作用，与多种炎症性疾病及自身免疫性疾病的发生发展有关。Th17细胞主要依靠分泌细胞因子发挥功能，主要分泌的细胞因子有IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-6、TNF-α等，其中最主要的效应分子为IL-17A，其次有IL-17F、IL-22、IL-21。随着对Th17细胞研究的深入，发现Th17细胞除和系统性红斑狼疮、系统性硬皮病、炎症性肠病和银屑病等自身免疫性疾病相关外，还与过敏性哮喘、AD等过敏性疾病关系密切［4］。沈斌等［5］研究显示急性期AD患者外周血Th17细胞比例显著升高，外周血中IL-17水平急性期高于正常对照组及慢性期。IL-17能激活角质形成细胞产生固有免疫防御，保护皮肤免受到病原菌入侵［6］。IL-17A 是IL-17细胞因子家族成员之一，是Th17细胞发挥免疫调节功能的主要效应因子。IL-17A和IL-17F均主要由Th17细胞产生，通常同时表达［7］。IL-17F通过招募中性粒细胞并有效促进多种细胞因子释放，参与机体多种炎性疾病的发生、发展，不同于IL-17A，IL-17F诱导炎症反应的活性较低［8］。邹明华等［9］研究显示AD患者皮损及正常皮肤均有IL-17A mRNA的表达，但AD患者皮损中IL-17A mRNA的表达水平明显高于正常皮肤组织，且其表达量与患者湿疹面积及严重程度指数（EASI）评分呈显著的正相关。本研究发现不同严重程度AD患者外周血Th17细胞及IL-17A与正常对照组比较，均有不同严重程度的增高，且随着病情加重而增高更明显，重度AD患者与轻中度患者比较，亦有所增高，重度AD患者外周血IL-17F水平与正常人比较同样有所增高。因为AD患者发病前可能出现免疫失衡，介导免疫损伤，通过Th17细胞及IL-17A、IL-17F表达增强，从而对AD的发生及病情发展中起着重要作用。目前AD的确切发病机制尚未阐明，因此从根本上控制本病仍难以实现。进一步研究其发病机制，对于改善当前的治疗手段、开发新的治疗方法非常必要［10］。目前国际上已开始研发多种生物制剂，例如作用于IL-17及其受体的靶向药物，如IL-17R-Ig融合蛋白、IL-17抗体等，可尝试用此类生物制剂改善AD患者的免疫状态、缓解病情。

［1］Hayashida S，Uchi H，Moroi Y，et al.Decrease in circulating Th17 cells correlates with increased levels of CCLl7，IgE and eosinophils in atopic dermatitis［J］.J Dermatol Sci，2011，61：180-186.

［2］Williams HC，Burney PG，Hay RJ，et al.The U.K Working Party's Diagnostic Criteria for Atopic Dermatitis.I.Derivation of a minimum setofdiscriminatorsforatopicdermatitis［J］.BrJDermatol，1994，131：383-396.

［3］中华医学会皮肤性病学分会免疫学组、特应性皮炎协作研究中心，中国特应性皮炎诊疗指南（2014版）［J］.中华皮肤科杂志，2014，47（7）：511-514.

［4］Souwer Y，Szegedi K，Kapsenberg ML，et al.IL-17 and IL-22 in atopic allergic disease［J］.Curr Opin Immunol，2010，22：821-826.

［5］沈斌，屠巧峰，冷建杭，等.特应性皮炎患者外周血辅助性T细胞17与白介素17的检测［J］.中华皮肤科杂志，2012，45（2）：106-109.

［6］ Cavni A，Pennino D，Eyerich K.Th17 and Th22 in skin allergy［J］. Chem Immunol Allergy，2012，96：39-44.

［7］ Miossec P，Kolls JK.Targeting IL-17 and Th17 cells in chronic inflammation［J］.Nat Rev Drug Discov，2012，11：763-776.

［8］刘志华，黄石，齐青松，等.类风湿性关节炎患者血清IL-17A和IL-17F的表达及临床意义［J］.海南医学，2013，24（15）：2262-2263.

［9］邹明华，刘琼芬，李常兴，等.白细胞介素17A在异位性皮炎患者皮损内的表达及意义［J］.广东医学，2010，31（5）：586-587.

［10］Katoh N.Future perspectives in the treatment of atopic dermatitis［J］. Dermatol，2009，36：367-376.

Effects of Th17，IL-17A and IL-17F on Patient's Condition of Atopic Dermatitis

Ren Xiaoli，Su Xiangchuan，Shi Qingqing，Hu Yayu，Chen Xiang'en，Chen Jian
Taizhou Municipal Hospital in Zhejiang Province，Taizhou 318000，China

ObjectiveIn order to investigate the variations of Th17，IL-17A and IL-17F in peripheral blood of the patients with different severity atopic dermatitis（AD）and explore their significances.MethodsThe percentage of Th17 cells in peripheral blood of patients with AD were determined by flow cytometry，the levels of IL-17A，IL-17F were detected by ELISA，meanwhile，in healthy adults as controls.ResultsThe percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were increased in patients with the mild AD in comparison with healthy controls（P＜0.05）.The percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were significantly higher in patients with the moderate AD than those of healthy controls（P＜0.01）.The level of IL-17F significantly increased in patients with the severe AD in comparison with in healthy controls（P＜0.05）.The percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were higher in patients with the moderate AD than the mild AD（P＜0.05）.The percentage of Th17 cells and the level of IL-17A were higher in patients with the severe AD in comparison with that the moderate AD（P＜0.05）. Conclusion The Th17 cell，IL-17A and IL-17Fmay play an important role in the onset，development of patients with AD.

Atopic dermatitis；T Helper Type 17 Cells；Interleukin-17A；Interleukin-17F

R

A

1672－0709（2016）03-0163－03

2015-02-05）