陈晴　　刘洋　　张勤修　　李昕蓉



·实验研究·

穴位埋线调节变应性鼻炎模型大鼠血清Th细胞因子平衡状态的实验研究*

陈晴1刘洋1张勤修2李昕蓉1

目的 探讨穴位埋线对变应性鼻炎实验动物外周血清的sIgE、IL-4、IL-10、INF-γ水平的影响及其作用机制。方法用卵清蛋白（OVA）建立AR大鼠模型，实验组大鼠穴位埋线后2周，处死动物采血，取血清送检。用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）对各组大鼠外周血清sIgE、IL-4、IL-10、INF-γ变化进行观察。结果 ①模型组大鼠外周血清sIgE、IL-4、IL-10水平明显升高，与空白组相比有明显差异（P＜0.05）；INF-γ水平升高，与空白组相比没有明显差异（P＞0.05）。②实验组大鼠外周血清sIgE、IL-4、IL-10水平显著下降，与模型组相比有统计学意义（P＜0.05），与空白组相比没有显著差异（P＞0.05）；INF-γ水平显著升高，与空白组、模型组相比有显著差异（P＞0.05）。结论 穴位埋线可以通过调节变应性鼻炎大鼠血清sIgE、IL-4、IL-10和INF-γ水平，调节Th1/Th2水平，改善变应性鼻炎症状。

穴位埋线；变应性鼻炎；大鼠模型；细胞因子

变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是由于IgE介导的鼻黏膜的Ⅰ型变态反应性疾病，其主要症状是鼻痒、流清水样涕、鼻塞和喷嚏［1］。现已有证明表示全球已有超过6亿AR患者。任何国家、种族、年龄、性别的人们都可能受到AR的困扰［2］。变应性鼻炎已是一种常见病、多发病，带给人们生活困扰和庞大的经济困扰。寻求有效的治疗方式迫在眉睫。穴位埋线在近年来的研究［3，4］已表明是治疗变应性鼻炎的有效、安全的方法，但其作用机制尚不明确。本实验通过建立大鼠变应性鼻炎的模型，以穴位埋线为干预手段，从细胞因子方面初步探讨其作用机制。

材料与方法

1动物来源及分组

1成都中医药大学（四川成都，610072）

2成都中医药大学附属医院耳鼻咽喉科

选用清洁级（SP）SD大鼠共36只，雌雄各半，体重250～280g，由四川省中医药科学院提供，动物合格证号：Scxk（川）2013-100。饲养于四川省中医药科学院动物实验中心（室温18～22℃，日温差不超过3℃，相对湿度60%～70%，日光灯照明，12小时明暗相间，自动定时过滤通风换气，换气频度10～15次/小时）。分性别饲养，全价颗粒饲料及自由饮水、采食。适应饲养1周后，利用电脑随机序列号将36只动物随机分为3组，即空白组、模型组和实验组，每组12只。

2造模方法

AR大鼠模型建造采用卵清蛋白致敏法。即基础致敏阶段，采用卵清蛋白0.3mg（OVA，Albumin Egg，购自 Sigma公司）为抗原，氢氧化铝 30mg（Aluminum hydroxide，成都市科龙化工试剂厂）为佐剂，加生理盐水1ml形成混悬液。模型组和实验组大鼠进行腹腔注射，隔日1次，共7次。鼻腔激发阶段，模型组和实验组动物以5%卵清蛋白50uL/侧滴鼻，每日1次，连续7天。致敏维持阶段，即经过激发，仍以5%卵清蛋白50uL/侧滴鼻，隔日1次，直至实验结束。空白组不做任何特殊处理。

3模型评价

根据文献［5］，每次于激发后30min内观察大鼠症状，按评分系统计算行为学总分（＞5分为动物模型成功），评分标准见表1。

表1　动物行为学评分标准

4干预方法

实验组大鼠进行一次双侧迎香穴埋线治疗。参照文献［6］迎香穴的的定位为：大鼠直视时眼珠中心向下，在鼻孔两旁约3mm处。埋线时将大鼠经3%戊巴比妥钠行腹腔注射麻醉后，用碘伏棉球消毒穴位及周围。选用9号埋线针，自针尖方向装入长约0.2～0.3cm的000号羊肠线。自穴位下方约0.5cm处朝向穴位快速进针刺入，将羊肠线推入穴位。退针后棉球按压针眼1～2min。术后隔日以碘伏棉球消毒穴位表面。

5标本制备

实验组动物穴位埋线14天后，以3%戊巴比妥钠行大鼠腹腔注射麻醉，仰卧于平板，四肢稍加固定。用5号尖刀刀片将大鼠右侧腹股沟处皮肤及浅筋膜打开，分离股动脉后，以组织剪剪开血管壁，用一次性采血管采血，静置离心，取血清送检。

6统计学方法

用SPSS 19.0统计软件对数据进行处理，各组所得结果，计量资料符合正态分布时，以均数±标准差（¯±s）进行描述，两组间数据比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，相关分析采用Pearson分析；当不符合正态分布时，采用非参数检验方法。设P＜0.05时，数据具有显著性差异。

结果

1模型评估

经观察、评分及统计后发现，模型组与实验组型的大鼠均出现典型的AR症状，如喷嚏、流涕、搔抓等，但无哮喘及死鼠。且两组大鼠平均积分为6.3，明显高于空白组评分1.2（P＜0.01）。证实变应性鼻炎大鼠模型建立成功。

2大鼠外周血清IL-4、IL-10、INF-γ、sIgE的水平变化

表2　大鼠外周血清IL-4、IL-10、INF-γ、sIgE水平变化

通过表2可见，三组细胞因子的组间差别均有统计学意义（P＜0.01），可以认为3个处理组的细胞因子的总体均数不全相同。模型组IL-4、IL-10和sIgE的水平明显升高，与空白组相比有明显差异（P＜0.05）；INF-γ水平也有升高，与空白组相比没有明显差异（P＞0.05）。实验组IL-4、IL-10和sIgE的水平明显降低，与模型组相比有明显差异（P＜0.05），与空白组相比没有明显差异（P＞0.05）。实验组INF-γ水平明显升高，与空白组、模型组相比有明显差异（P＜0.05），见图1。

图1　大鼠外周血清IL-4、IL-10、INF-γ与sIgE

讨论

变应性鼻炎是IgE介导的慢性变态反应炎症性疾病，Th1和Th2细胞间免疫反应失衡是导致变应性鼻炎发生的免疫学基础［7，8］。Th1和Th2免疫反应间存在着互相制衡的机制维持［9］。Th1主要分泌IL-2、IL-12、IFN-γ等，统称Th1型细胞因子，主要参与细胞免疫。其中以IFN-γ为特征因子，可以诱导单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、皮肤成纤维细胞、血管内皮细胞、星状细胞等抗原的表达，使其参与抗原提呈和特异性免疫的识别过程。并上调内皮细胞ICAM-1（CD54）表达，促进巨噬细胞FcγR表达，协同诱导TNF并促进巨噬细胞杀伤病原微生物。此外，IFN-γ还可促进Th1细胞发育和抑制TH2细胞活化与增殖。Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-9、IL-10、IL-13和GM-CSF（粒-巨噬细胞集落刺激因子），统称Th2型细胞因子，主要参与体液免疫。Th2型细胞因子在呼吸道变态反应性疾病的免疫病因学中起重要作用。IL-4为Th2细胞产生的特征性细胞因子，一方面可以抑制Th1细胞产生细胞因子的能力，另一方面促进IgE生成和形成以IgE为基础的嗜酸粒细胞与肥大细胞浸润与介导的免疫应答。

穴位埋线疗法是针灸疗法的延伸和发展。有文献［10］描述在穴位埋线对变应性鼻炎的治疗中，穴位区埋入异体蛋白线后，可能使人体淋巴细胞致敏，并配合体液中的巨噬细胞使其分解吸收，成为多肽、氨基酸，并产生多种淋巴因子，从而对疾病产生调节作用。也有文献［11］报道穴位埋线利用医用羊肠线的异体蛋白在体内经软化、分解、液化、吸收的作用，对穴位产生生理、物理及化学刺激而获得一种“长效针感”效应，使机体免疫、抗过敏能力得以提高。但这些不足以解释穴位埋线治疗变应性鼻炎的机理。本次试验通过细胞因子方向对穴位埋线治疗变应性鼻炎的机理进行初步探讨。

本次实验显示，变应性鼻炎模型组大鼠血清IL-4、IL-10、IgE水平升高，与空白组相比差异具有统计学意义，INF-γ水平略有升高，较空白组没有明显差异，表明模型组大鼠的Th2细胞水平升高，Th1/ Th2平衡被打破，与现代研究发现变应性鼻炎患者或实验动物体内存在Th1/Th2平衡失调［11-13］相吻合。实验组动物经穴位埋线治疗后，血清IL-4、IL-10、IgE水平下降，与模型组相比较，差异具有统计学意义，血清INF-γ水平则明显升高，较模型组与空白组动物均有明显差异，体现了Th1细胞水平升高，抑制Th2细胞分泌，降低免疫应答效应，减轻变应性鼻炎症状。实验结果表明穴位埋线改善了AR动物模型中由Th2细胞参与的炎性反应，并改善了IL-4、IL-10、IgE的表达水平。由此我们推测，穴位埋线可通过调节Th1/Th2平衡，缓解变应性鼻炎症状。但变应性鼻炎的发病及调节机制复杂，除本次试验涉及的IL-4、IL-10等，还有其他诸多细胞因子以及神经肽。穴位埋线如何对其他细胞因子及神经肽进行调节，及其相关变化规律，还需结合现代科学技术进一步研究完善。

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2Bousquet J，Khaltaev N，Cruz AA，Denburg J，Fokkens WJ，Togias A，Zuberbier T，Baena-Cagnani CE，Canonica GW，van Weel C，Agache I，A？t-Khaled N，Bachert C，Blaiss MS，Bonini S，Boulet LP，Bousquet PJ，Camargos P，Carlsen KH，Chen Y，Custovic A，Dahl R，Demoly P，Douagui H，Durham SR，Gerth Van Wijk R，Kalayci O，KalinerMA，KimYY，KowalskiML，etal：Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma（ARIA）.Allergy 2008，Suppl 86：8-160.

3刘欢兴.穴位埋线治疗变应性鼻炎的临床研究［D］.成都中医药大学，2012.

4蒙珊，徐崟，吕计宝，等.穴位埋线治疗变应性鼻炎的疗效观察［J］.四川中医，2013，31（6）：136-138.

5赵秀杰，赵德荣.鼻超敏反应实验模型的建立［J］.中华耳鼻咽喉科杂志，1993，28（1）：17-18.

6华兴邦，李辞蓉，周浩良，等.大鼠穴位图谱的研制［J］.实验动物与动物实验，1991，1：1-5.

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（收稿:2014-10-13修回：2015-02-15）

The experiment research of catgut implantation at acupoints adjust the balance of The cytokines on the rat model with allergic rhinitis

CHEN Qing，LIU Yang，ZHANG Qinxiu，LI Xinrong
Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan Province 610072，PR China

Objective To investigate the effect of catgut implantation at acupoints on sIgE IL-4，IL-10，sIgE and INF-γ，as well as its mechanism in a rat model with allergic rhinitis.Method Ovalbumin（OVA）-sensitized rats were randomly assigned into three groups.After two weeks of catgut implantation at acupoints in the experimental group，serum samples were collected.The levels of IL-4，IL-10，sIgE and INF-γ were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）method.Result①Serum IL-4，IL-10 and sIgE were significantly increased in the model group in comparison with the blank group（P＜0.05）；INF-γ also increased in the model group，but without significant difference（P＞0.05）.②Serum IL-4，IL-10 and sIgE decreased significantly in experimental group in comparison with the model group（P＜0.05），but there were no significant difference compared with the blank group（P＞0.05）；INF-γ increased significantly，in comparison with the blank model group（P＞0.05）.Conclusion The catgut implantation at acupoints might improve the symptoms of allergic rhinitis by regulating the level of serum IL-4，IL-10，sIgE and INF-γ.

Catgut implantation at acupoints；Allergic rhinitis；Rat model；Cytokine

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.01.002

10.16542/j.cnki.issn.1007-4856.2016.01.001

国家自然科学基金面上项目（No.81273985），高等学校博士点学科专项科研基金项目（No.20125132110011），四川省国际科技合作与交流研究计划项目（No.2013HH0021）

张勤修，主任医师.Email:zhqinxiu@163.com