梁丽霞，肖　燕，高　玮

(广东省深圳市南山区计划生育服务中心检验科　518052)



HPV L1壳蛋白表达与宫颈上皮瘤变及HPV分型的关系*

梁丽霞，肖燕，高玮

(广东省深圳市南山区计划生育服务中心检验科518052)

摘要:目的分析HPV L1壳蛋白的表达与宫颈上皮病变的关系及其在HPV分型中的分布情况。方法对4 320例妇女进行宫颈液基细胞学(LCT)和HPV分型检测，对LCT≥无明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)或HPV阳性者行HPV L1检测，并对LCT≥ASC-US且HPV阳性者行阴道镜下组织病理学检查。结果对LCT≥ASC-US或HPV阳性者(共401例)进行HPV L1检测，HPV L1阳性率为34.9%(140/401)。对LCT≥ASC-US且HPV阳性者129例进行组织病理学检查，LCT与组织病理学诊断符合率为79.2%。HPV L1在LCT诊断为ASC-US、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)的患者中阳性率分别为40.2%(29/72)、69.2%(18/26)、9.0%(2/22)。386例HPV感染者中，单一型别感染率居前四位的是HPV52、58、16、18型，其HPV L1阳性率分别为53.3%、28.9%、12.2%、5.6%。结论HPV L1阳性率随宫颈病变级别增高呈下降趋势，LCT联合HPV L1检测可为宫颈病变预后判定提供参考依据。

关键词:人乳头瘤病毒；HPV L1壳蛋白；宫颈上皮内病变；基因分型

流行病学和分子生物学研究已证明人乳头瘤病毒(HPV)感染是发生宫颈癌的直接原因和必要因素，但感染HPV的女性并不全都发展为宫颈癌或相关病变[1]。临床研究显示HPV感染具有自限性，约90%的感染者能清除HPV而自愈，仅有不到10%的HPV感染者发展为明确病变[2]。HPV是一类对皮肤及黏膜上皮细胞具有特殊嗜性的双链环状DNA病毒，能合成一系列蛋白质，包括自身结构蛋白和致瘤蛋白。HPV L1蛋白是HPV的主要衣壳蛋白，由HPV DNA的晚期基因转录区L1编码合成，为晚期蛋白，与病毒的增殖有关，近年来国外一些研究发现HPV Ll蛋白具有增强机体细胞免疫应答的功能，是一个判定预后的标记物[3-4]。本项目旨在研究HPV L1壳蛋白的表达与HPV分型及宫颈上皮病变的关系，探讨HPV L1壳蛋白表达在宫颈癌筛查中的作用，为宫颈病变预后判断提供参考和借鉴。

1资料与方法

1.1一般资料从2015年1～6月来深圳市南山区计划生育服务中心进行宫颈癌筛查的4 320例妇女(有性生活史、年龄在19～65岁)进行宫颈液基细胞学(LCT)和HPV分型检测，对LCT≥无明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)或HPV阳性者行HPV L1检测，并对LCT≥ASC-US且HPV阳性者行阴道镜下组织病理学检查。

1.2标本采集要求筛查人员避开月经期，最好在经期过后3～5 d，检查前3 d避免性生活、阴道上药和阴道冲洗，检查时先排尿。使用一次性宫颈脱落细胞采集器，将其放入宫颈口处，单方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞标本，取出后放入液基细胞保存液中。

1.3方法

1.3.1HPV分型检测通过摄取、扩增、杂交(采用PCR-反向点杂交技术)、洗膜、显色和读片等步骤检测23种基因(高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82，低危型HPV6、11、42、43、81、83)，检测试剂盒由亚能生物技术公司提供。

1.3.2LCT检测采用深圳长海益生物科技有限公司生产的细胞保存液，采用美国进口的AutouCyte PRE液基细胞系统进行制片，采用TBS报告系统进行判断。

1.3.3HPV L1检测试剂来源于美国爱迪旺思医疗赛泰-细胞/组织人乳头瘤染色试剂盒，HPV L1诊断以免疫组织/细胞化学技术和非同位素标记核酸分子杂交技术为基础，同时采用核酸水平和免疫水平双重检测人乳头瘤病毒壳蛋白(HPV L1)，仅有1个被染色的细胞核呈红色即可作出阳性诊断(见图1)。

图1　　　　　免疫细胞化学方法检测HPVL1壳蛋白阳性细胞(10×10)

1.4统计学处理采用SPSS13.0软件包进行统计学处理，率的比较采用χ2检验，双侧检验水平α=0.05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1HPV L1壳蛋白在宫颈上皮内病变及组织病理学检查中的表达情况4 320例筛查人群中，对LCT≥ASC-US或HPV阳性者共401例进行HPV L1检查，其中LCT≥ASC-US且HPV阳性者129例，单一HPV阳性者257例，单一LCT≥ASC-US者15例。LCT≥ASC-US且HPV阳性者129例中，ASC-US 72例、不典型鳞状细胞不除外高度病变(ASCUS-H) 9例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)26例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)22例，其组织病理学诊断为炎症者45例，宫颈上皮内瘤样病变(CIN)1～3级者分别有46、24、14例，不同组织病理学诊断结果患者中，HPV L1阳性率分别为37.8%(17/45)、63.0%(29/45)、12.5%(3/24)、7.1%(1/14)。根据组织病理学检查结果上、下相差一级为符合的原则，宫颈细胞学与组织病理检查结果总符合率为79.2%(38/48)，低度病变与高度病变的符合率分别为73.1%与86.3%。在LCT诊断为ASC-US、LSIL、HSIL的患者中，HPV L1表达率分别为40.2%(29/72)、69.2%(18/26)、9.0%(2/22)，三者间差异有统计学意义(P<0.05)，见表1；组织病理学结果为炎症、CIN1级、CIN2级、CIN3级的患者中，HPV L1表达率分别为37.8%、63.0%、12.5%、7.1%，四者间差异也有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表1　　129例不同LCT病变级别患者HPV L1表达情况[n(%)]

表2　　129例不同LCT病变级别患者的组织病理学检查及HPV L1表达情况(n)

2.2HPV L1蛋白在HPV不同亚型之间的表达情况4 320例筛查人群中，HPV阳性386例，感染率为8.94%，单一型别感染311例，占80.6%(311/386)，合并感染75例，占19.4%(75/386)。单一型别感染中，感染率居前四位的亚型是HPV52、58、16、18型，共269例，占69.7%。HPV L1壳蛋白在上述4种亚型中的表达情况见表3。HPV52、58、16、18型感染者中，HPV L1阳性者共有90例，阳性率为33.4%(90/269)；HPV16、18型的HPV L1阳性率明显低于HPV52、58型(P<0.05)，提示HPV16、18型感染者宫颈恶性病变的倾向性更强。

表3　　HPV52、58、16、18型感染者中HPV L1的分布[n(%)]

3讨论

高危型HPV感染是宫颈癌的主要致病因素。宫颈HPV感染是普遍存在的，但大多数可以自愈，有文献报道，约60%的HPV感染可以在1年内被自身免疫系统清除，90%可以在3年内被清除[5]。HPV L1壳蛋白为HPV的主要壳蛋白，是生产HPV疫苗的主要抗原，HPV L1壳蛋白表达与HPV的早期复制和感染密切相关，但在病毒整合到宿主DNA上以后逐渐消失，而HPV整合到宿主DNA上是引发宫颈恶性病变的重要环节[6]。

129例LCT≥ASC-US且HPV阳性患者的HPVL1阳性在ASC-US、ASCUS-H、LSIL、HSIL分别为40.3%、11.1%、69.2%、9.1%；其对应的组织病理学中的阳性率在炎症、CIN1级、CIN2级、CIN3级分别为37.8%、63.0%、12.5%、7.1%，同样显示HPVL1的阳性率随着病变级别的升高呈下降趋势。这与国内张佳立等[7]研究结果相符合。表明体内有HPVL1的存在，病变有被自身免疫清除的可能，对于存在ASC-US、LSIL等宫颈病变而HPVL1呈阳性的患者，是否可以暂不做创伤性的检查与过度治疗，而作为跟踪

随访的对象，为探讨宫颈癌筛查的手段提供更合理的建议。

在386例HPV阳性人群中，单一型别HPV感染居前四位的是HPV52、58、16、18型，共269例，占69.7%(269/386)，4种亚型单一感染例数分别为134、60、51、24例，HPV52、58亚型的感染例数明显高于HPV16、18型，这与国内其地方报道HPV16型感染最多不符，这可能与HPV区域性感染不一有关；其对应HPV L1阳性表达率分别为53.3%、28.9%、12.2%、5.6%。HPV52、58型感染者中HPV L1阳性率明显高于HPV16、18型。HPV16、18型导致宫颈恶性病变的倾向高于HPV52、58型，这与国内报道相符[8]。

综上所述，HPV L1检测联合LCT和HPV分型不仅能了解机体HPV的感染状态，还能了解机体的免疫状态。HPV L1的阳性率都随病变级别的增加而呈下降趋势，提示HPV L1的表达有重要的预测价值；而且检测宫颈病变脱落细胞中HPV L1蛋白不需重新取材，可直接在LCT涂片上染色，操作简单，敏感性高，稳定性好，有望成为预测宫颈病变程度及恶性进展趋势的生物学标志物。

参考文献

[1]郎景和．妇科手术笔记[M]．北京：中国科学技术出版社，2001．

[2]Nobbenhuis MA,Walboomers JM,Helmerhorst TJ,et al.Relation of human papillomavirus status to cervical lesions and consequences for cervical-cancer screening:a prospective study[J].Lancet,1999,354(9172):20-25.

[3]Mehlhorn G,Obermann E,Negri G,et al.HPV L1 detection discriminates cervical precancer from transient HPV infection:a prospective international multicenter study[J].Mod Pathol,2013,26(7):967-974.

[4]Xiao W,Bian ML,Ma L,et al.Immunochemical analysis of human papillomavirus L1 capsid protein in Liquid-Based cytology samples from cervical lesions[J].Acta Cytol,2010,54(5):661-667.

[5]Forcier M,Musacchio N.An overview of human papillomavirus infection for the dermatologist:disease,diagnosis,management,and prevention[J].Dermatol Ther,2010,23(5):458-476.

[6]Melsheimer P,Kaul S,Dobeck S,et al.Immunocytochemical detection of HPV high-risk type L1 capsid proteins in LSIL and HSIL as compared with detection of HPV L1 DNA[J].Acta Cytol,2003,47(2):124-128.

[7]张佳立，郜红艺，张江宇，等．宫颈液基细胞HPV L1壳蛋白表达的临床意义[J]．诊断病理学杂志，2010，17(6)：456-459．

[8]彭雅亚,许淑媛,金霞,等.宫颈上皮内瘤变和宫颈癌与HPV16、18关系的研究[J].标记免疫分析与临床,2010,17(1):48-49.

* 基金项目：广东省深圳市南山区卫计委科研项目(南科研卫2014014号)。

作者简介：梁丽霞，女，主管检验技师，主要从事临床检验研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.017

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)14-1944-03

(收稿日期：2016-01-20修回日期：2016-04-11)

Relationship of HPV L1 capsid protein expression with cervical squamous imtraepithelial lesiong and HPV typing*

LIANGLixia，XIAOYan，GAOWei

(DepartmentofClinicalLaboratory,FamilyPlanningServiceCenterofNanshanDistrict,Shenzhen,Guangdong518052,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the relation between HPV L1 capsid protein expression with cervical squamous intraepithelial lesions and its distribution situation in HPV typing.Methods A total of 4 320 women were performed the liquid based cytology test(LCT) and HPV typing.The cases of LCT ≥ no diagnostic sense of atypical squamous epithelial cells(ASC-US) or HPV positive were performed the HPV L1 detection.Then the cases of LCT ≥ASC-US and HPV positive were performed the colposcopic histopathological examination.ResultsA total of 401 cases of LCT≥ASC-US or HPV positive were performed the HPV L1 detection,the HPV L1 positive rate was 34.9%(140/401).One hundred and twenty-nine cases of LCT ≥ASC-US and HPV positive were performed the histopathological examination,the coincidence rate of LCT and histopathological examination was 79.2%.The positive rates of HPV L1 in ASC-US,LSIL and HSIL by LCT were 40.2%(29/72),69.2%(18/26) and 9.0%(2/22)respectively.Among 386 cases of HPV infection,the top 4 of single genotype infection were HPV 52,58,16 and 18,their HPV L1 positive rates were 53.3%,28.9%,12.2% and 5.6% respectively.ConclusionThe HPV L1 positive rate shows the decreasing trend with the cervical lesion grade increase.LCT combined with HPV L1 detection can provide reference basis for judging the prognosis of cervical lesion.

Key words:HPV；HPV L1 capsid protein;cervical squamous intraepithelial lesions;genotype