洪兰，洪英姬，金红花

（1.延边大学医学院 生理学与病理生理学教研部，吉林 延吉 133002；2.延边大学附属医院 药学部，吉林 延吉 133000）



论著

糖原合成酶激酶3β介导心房钠尿肽对H9c2心肌细胞线粒体保护作用的研究*

洪兰1，洪英姬1，金红花2

（1.延边大学医学院 生理学与病理生理学教研部，吉林 延吉 133002；2.延边大学附属医院 药学部，吉林 延吉 133000）

摘要：目的探讨心房钠尿肽（ANP）对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法采用四甲基罗丹明乙酯（TMR E）荧光染料和激光共聚焦显微镜成像技术测定H9c2心肌细胞TMR E荧光强度的变化，即线粒体膜通透性转换孔（mPTP）开放程度。利用双氧水H2O2诱导H9c2心肌细胞线粒体mPTP的开放，预处理不同浓度的ANP后，观察ANP对mPTP开放的影响；同时利用Western blot检测H9c2心肌细胞的糖原合成酶激酶3β（GSK-3β Ser9）磷酸化程度，即失活程度。利用激活型GSK-3β质粒转染的H9c2心肌细胞（GSK-3β-S9A-HA），来观察ANP对GSK-3β-S9A-HA的线粒体mPTP开放程度。结果与对照组（600μmol/L H2O2）比较，0.01、0.10、1.00和10.00nmol/L ANP明显抑制H2O2对TMR E荧光强度的衰减效应（P<0.05），其中1.00 nmol/L的ANP效应最强。Western blot检测结果显示，0.01、0.10、1.00和10.00 nmol/L ANP明显增强GSK-3β Ser9的磷酸化（P<0.05），即抑制GSK-3β的活性。利用GSK-3β-S9A-HA后发现，ANP（1.0nmol/L）不能抑制mPTP开放（与H9c2比较P<0.05）。结论ANP通过调节GSK-3β活性来抑制H9c2心肌细胞mPTP的开放，从而保护H9c2心肌细胞的缺血再灌注损伤。

关键词：心房钠尿肽；缺血再灌注；线粒体膜通透性转移孔；糖原合成酶激酶3β

心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）是由心房肌细胞合成和分泌的肽类激素。ANP对缺血再灌注损伤具有较好的保护作用。在大鼠离体心脏灌流模型中，ANP可以增加再灌注心脏的心输出量，减少缺血再灌注心脏的心梗面积，对急性心肌梗死患者静脉注射ANP能减轻缺血再灌注造成的心脏损伤[1]，但ANP发挥心肌保护作用的具体机制尚未清楚。线粒体膜通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore，mPTP）的开放是导致缺血再灌注损伤的关键因素[2]，防止mPTP的开放是减轻再灌注损伤的有效手段，抑制mPTP的开放是一些心脏保护类药物，如腺苷，抗缺血再灌注损伤的共同作用机制。……