孙丽娜　李川　刘洋　李德新　梁米芳



·技术方法·

易错PCR提高人源抗狂犬病毒单链抗体的亲和力

孙丽娜李川刘洋李德新梁米芳

102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

【摘要】目的通过易错PCR技术提高1株人源抗狂犬病毒单链抗体RV08的亲和力。方法 采用Agilent公司GeneMorph II Random Mutagenesis Kit对RV08轻、重链可变区进行易错PCR扩增，随机引入突变，通过单链抗体(Single-chain antibody fragment ScFv)噬菌体呈现技术构建随机突变抗体文库，经狂犬病毒颗粒aG株固相富集筛选，通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定。利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达，通过非竞争ELISA测定突变抗体亲和力。结果RV08随机突变抗体库的库容为6×106 cfu/ml，目的基因插入率为100%。重链序列突变频率约为0.95%，轻链序列突变频率约为1.2%，最后获得5株高亲和力的抗体突变株，其中3株抗体HL46、HL2和HL37亲和力分别为原始克隆RV08的1.79倍、1.47倍和1.23倍。结论易错PCR技术与噬菌体抗体库技术相结合使得抗体亲和力获得明显提高，为抗体的体外亲和力成熟提供了参考方法。

【主题词】狂犬病毒；单链抗体；亲和力

Fund programs: State Project For Essential Drug Research and Development(2014ZX09201041004,2013ZX09304103001006)

狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒引起的急性传染病[1]。根据世界卫生组织(World health organization, WHO)推荐的处理原则，III级暴露应立即处理伤口并注射抗狂犬病毒免疫球蛋白(rabies immune globulin，RIG)，随后接种狂犬病疫苗[2]。由于RIG具有副反应，产品成本高，供应量有限并且存在潜在的血源性感染等缺陷，因此基因工程抗体是取代RIG用于狂犬病的暴露后预防的新方向。近年来关于人源抗狂犬病毒单克隆抗体国内外已有很多报道，但对于抗狂犬病毒人源单抗的亲和力成熟研究鲜有报道，抗体的功能特性与亲和力高低密切相关，抗体亲和力改造也是抗体工程需要解决和发展的重要技术之一。……