李琦　魏亚梅　韩旭　韩占英　张艳波　许永刚　齐顺祥



·技术方法·

汉坦病毒荧光抗体中和试验方法的建立

李琦魏亚梅韩旭韩占英张艳波许永刚齐顺祥

050021 石家庄，河北省疾病预防控制中心

【摘要】目的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)技术应用于汉坦病毒中和抗体的检测的探索与改进。方法采用固定病毒稀释血清的方法，将不同稀释度的血清和固定浓度的病毒经37 ℃中和1 h，然后加入到Vero-E6细胞已长成单层的96孔板上，37 ℃、5% CO2培养7 d，经固定和荧光染色, 即可在荧光显微镜下判定结果，根据公式计算血清的中和滴度。结果最合适的细胞浓度为4×104～4.5×104/孔，病毒血清混合液在37 ℃中和较好。用此方法检测双价灭活疫苗免疫后30份人血清标本的中和抗体，与空斑减少中和试验结果比较，该方法较敏感、稳定。结论荧光抗体病毒中和试验法具有快速、简便、敏感、稳定的特点。

【主题词】肾综合征出血热；汉坦病毒；荧光抗体病毒中和试验

Fund programs: Hebei Province Science and Technology and Development Plan Program (13277719D)

汉坦病毒(Hantaviruses, HV)是肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndromes，HFRS)的主要病原体，主要临床表现为发热、出血和肾脏损害，病死率高，危害严重。目前，HV中和抗体的检测方法主要是细胞微量中和试验和空斑减少中和试验(Plaque Reduction Neutralization Tests，PRNT)。PRNT具有实验周期长、技术难度大、实验条件要求高等缺点，一般难以开展。细胞微量中和试验操作相对简便，更适用于国内应用和推广[1]。作为狂犬病病毒中和抗体水平测定的最佳方法之一的荧光抗体病毒中和试验(Fluorescent Antibody Virus Neutralization，FAVN) 技术，具有结果判定受主观因素影响小、可靠性高、操作简单、检测结果一致性好，适合大规模样本检测等优点，此方法在HV中和抗体检测中较少报道。……