余 倩 宋双红,2 李翠芹*

1.西北濒危药材资源开发国家工程实验室/药用资源与天然药物化学教育部重点实验室/陕西师范大学生命科学学院，陕西 西安 710119 2.西北工业大学生命学院特殊环境生物物理学研究所，空间生物实验模拟技术重点实验室，陕西 西安710072

红车轴草(TrifoliumpratenseL.)是一种多年生草本植物，属于豆科车轴草属，又名红三叶草，其花序和花枝含有大量异黄酮成分，因其具有雌激素样作用而备受关注[1]。研究表明红车轴草总异黄酮具有改善妇女更年期症状和防治疗骨质疏松的作用[1-3]。本研究采用血清药理学和体外培养MC3T3-E1成骨样细胞的方法观察含红车轴草总异黄酮的大鼠血清对MC3T3-E1成骨样细胞增殖、分化及矿化的影响，从细胞学水平探讨红车轴草总异黄酮促进骨形成的作用机制，为红车轴草总异黄酮治疗骨质疏松症的研究提供一定的资料。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1动物与细胞系：健康SD雌性大鼠32只，体重200±20 g，购自第四军医大学SPF动物实验中心，动物合格证号陕医动字08-014号。饲养条件：室温24±2 ℃，相对湿度40%～70%，每日人工照明和黑暗处理各12 h，自由饮水，喂食颗粒饲料。MC3T3-E1成骨样细胞系(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)。

1.1.2药物和试剂：红车轴草总异黄酮(陕西慈缘生物技术有限公司，含量≥98.0%，批号为CY140415)；α-MEM培养基和胎牛血清(FBS)(Gibco公司)；维生素C、β-甘油磷酸钠、噻唑兰(MTT)和胰蛋白酶(Sigma公司)；碱性磷酸酶试剂盒(南京建成生物工程研究所)；骨钙素(OC)测试盒(北京科盈美科技有限公司)；茜素红(天津化学试剂厂)；……