王玉楼　张英艳　孙玉琢　温秋婷

(齐齐哈尔医学院第一附属医院普外科，黑龙江　齐齐哈尔　161041)



乳腺癌患者组织中EphA4和Ki67的表达及其临床意义

王玉楼张英艳1孙玉琢温秋婷2

(齐齐哈尔医学院第一附属医院普外科，黑龙江齐齐哈尔161041)

〔摘要〕目的探讨乳腺癌患者组织中受体酪氨酸激酶肝细胞(Eph)A4和细胞增殖抗原Ki67的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取该院2012年1月至2015年6收治的乳腺癌患者108例，应用免疫组化法检测乳腺癌组织中EphA4和Ki67水平，并分析其与临床病理的关系，应用Pearson相关性分析EphA4和Ki67的相关性。结果乳腺癌组织中EphA4总阳性表达率、Ki67总阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.05)；EphA4和Ki67均与肿瘤大小、淋巴结转移情况和临床分期有关(P<0.05)，Pearson相关性分析显示：EphA4与Ki67呈正相关(P<0.05)。结论乳腺癌患者组织中会出现EphA4和Ki67高表达，且EphA4和Ki67与肿瘤大小、淋巴结转移情况和临床分期有关，两者之间也存在正相关关系。

〔关键词〕乳腺癌；受体酪氨酸激酶EphA4；细胞增殖抗原Ki67；病理特征

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，有研究显示，肿瘤的发生和发展与异常细胞增殖存在较大关系，细胞增殖抗原Ki67与细胞增殖存在较大关系，已经被用来评估多种肿瘤细胞的增长情况〔1〕。受体酪氨酸激酶肝细胞(Eph)A4是促红细胞生成素Eph的受体之一，可以用来评估神经系统的发育情况，近年来EphA4也用来评估肿瘤的发生和发展情况〔2〕。本研究探讨乳腺癌患者组织中EphA4和Ki67的表达情况及其与临床病理的关系。

1资料与方法

1.1一般资料选取我院2012年1月至2015年6收治的乳腺癌患者108例，均经手术治疗，且经病理确诊为乳腺癌，入选前均未经任何治疗；排除继发性乳腺癌、术前均未应用放疗、内分泌及化疗等治疗、不接受手术治疗者，年龄39～80〔平均(68.3±4.3)〕岁。根据TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期71例，Ⅲ～Ⅳ期37例；淋巴结转移49例，无淋巴结转移59例。研究经医学伦理委员会批准，所有患者及家属均签署知情同意书。

1.2方法选取入选者的乳腺癌病理及其癌旁正常组织，将其放置于10%的甲醛中固定，以常规的石蜡包埋，将其切成4 μm厚度切片待用。将切片常规脱蜡，然后以柠檬盐高压修复，0.3%双氧水-甲醇封闭，以1∶400倍的EphA4和Ki67多克隆抗体于4℃环境中孵育一夜。以二抗在室温环境下孵育0.5 h，然后进行二氨基联苯胺(DAB)染色、核复染，应用中性树胶进行封闭。所用试剂均由北京中杉生物技术公司提供，均根据操作说明由统一检验师操作。

1.3结果评价分别于显微镜下选取5个高倍镜视野，然后分别计约100个细胞，棕黄色表示阳性细胞，根据阳性细胞占有的比例判断结果。阴性：阳性细胞数<10%；弱阳性：阳性细胞数10%～25%；阳性：阳性细胞数26%～50%；强阳性：阳性细胞数>50%〔3，4〕，总阳性=弱阳性+阳性+强阳性。

1.4统计学方法应用SPSS17.0软件进行χ2检验、Pearson相关性分析。

2结果

2.1乳腺癌组织中EphA4和Ki67表达情况乳腺癌组织中EphA4弱阳性25例(23.15%)，阳性32例(29.63%)，强阳性27例(25.00%)，总阳性表达率77.78%；癌旁正常组织弱阳性5例(4.63%)，阳性2例(1.85%)，强阳性1例(0.93%)，总阳性表达率为7.41%，比较差异显著(P<0.05)。乳腺癌组织中Ki67弱阳性10例(9.26%)，阳性29例(26.85%)，强阳性18例(16.67%)，总阳性表达率52.78%；癌旁组织弱阳性9例(8.33%)，无阳性和强阳性表达，总阳性表达率8.33%，比较差异显著(P<0.05)。

2.2EphA4和Ki67表达与临床病理关系EphA4和Ki67与年龄无关(P>0.05)；但EphA4和Ki67均与肿瘤大小、淋巴结转移情况和临床分期有关(P<0.05)。见表1。

表1　EphA4和Ki67阳性表达与临床病理关系〔n(%)〕

2.3EphA4与Ki67相关性分析EphA4水平随着Ki67水平的增加而增加，且Pearson相关性分析显示：EphA4与Ki67呈正相关(r=0.793，P=0.011)。

3讨论

乳腺癌的发生和发展与多种因素有关，其中多基因病变发挥重大作用〔5〕。基因出现异常会导致细胞增殖和分化异常，细胞凋亡会明显降低，而凋亡又是导致肿瘤发生和发展的关键，凋亡能够抑制肿瘤细胞明显增长，进而抑制肿瘤细胞增殖〔6〕。Ki67是可以识别增殖细胞核基质上的核蛋白，该基因定位在10号染色体，主要作用是与细胞有丝分裂周期有关。Ki67抗原的半衰期非常短，当有丝分裂晚期该抗原会较快消失，因此可以较好反映细胞增殖情况，判断肿瘤细胞的生长活性〔7〕。

EphA4是Eph的一种，而Eph基因是现阶段被人类发现最大的受体酪氨酸激酶，与神经、血管以及多种组织的形成存在较大关系。据研究，该基因可以于多种脑组织中表达，且对神经系统的多样性具有维持作用〔8〕。也有研究显示，EphA4可以与多种肿瘤发生和发展有关，其中EphA4高表达与肿瘤进展、淋巴结转移以及复发等有关〔9〕。但是，Ki67和EphA4表达异常是否与乳腺癌有关研究较少。本研究结果与其他研究结果相似〔10〕，说明乳腺癌组织中确实存在Ki67和EphA4表达异常。且EphA4和Ki67表达异常会影响乳腺癌肿瘤发展，与肿瘤大小、淋巴结转移以及临床分期均有关系。分析其原因可能为：Ki67对维持DNA结构具有重要作用，在细胞有丝分裂中发挥重要作用，其表达高低可以在一定程度上反映细胞的增殖情况，当Ki67高表达时说明肿瘤细胞处于活跃增殖状态，肿瘤细胞增生活跃期转移能力也会明显增加，临床分期也会因此受到影响。EphA4会在肿瘤组织中高表达，基因启动子会出现改变，进而导致基因突变，染色体的片段出现缺失。当EphA4表达较高，基因突变明显，肿瘤细胞增殖不受控制，也会出现转移，引起临床分期改变。研究还说明在乳腺癌组织中EphA4与Ki67相互间存在一定影响，但是具体原因尚不清楚，有待进一步研究。

4参考文献

1魏昕，杨举伦.乳腺癌组织中ERCC1、Ki67、PCNA表达与蒽环类化疗药物敏感性的关系〔J〕.中国免疫学杂志，2015；31(2)：169-72.

2张彦，陆伟.Ki67在HBV相关肝细胞癌病理组织中的表达及其临床意义〔J〕.天津医药，2015；43(8)：929-31.

3孙宇，孙宁，杨绍时，等.MMP-9和Ki67在胰腺癌中表达的意义〔J〕.天津医药，2014；42(1)：44-6.

4何建明，黄伟，黄湛，等.ABCG2表达与浸润性乳腺癌患者术后复发转移的关系〔J〕.中国老年学杂志，2015；35(12)：3244-6.

5刘辉，吕丽琼，莫小勤，等.MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2在乳腺癌组织中的表达及意义〔J〕.现代生物医学进展，2015；15(16)：3046-8，3200.

6Hameetman L，van der Fits L，Zoutman WH，etal.EPHA4 is overexpressed but not functionally active in Sézary syndrome〔J〕.Oncotarget，2015；6(31)：31868-76.

7王斌，熊健，只向成，等.CD44+/CD24-细胞在乳腺癌组织中比例与乳腺癌远处转移关系〔J〕.中国肿瘤临床，2015；42(11)：555-8.

8李思琦，董颖，毕蕙，等.年轻妇女宫颈上皮内瘤变Ⅰ～Ⅱ级组织中p16InK4a和Ki67的表达及意义〔J〕.实用妇产科杂志，2014；30(4)：263-5.

9沈三弟，陈卓荣，肖高芳，等.Ki67、Her-2在Luminal型乳腺癌中表达的相关性研究〔J〕.重庆医学，2013；42(16)：1820-1，1823.

10黄华俊，王玲，韩芳，等.ER、PR及Ki67在乳腺癌新辅助化疗中的意义及预后相关因素分析〔J〕.河北医药，2015；37(12)：1782-4.

〔2015-12-10修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

基金项目：黑龙江省教育厅科学研究项目(No.12541935)

通讯作者：温秋婷(1978-)，女，硕士，讲师，主要从事女性生殖系统和乳腺疾病病理方面的研究。

〔中图分类号〕R73

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)13-3197-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.13.049

1齐齐哈尔医学院护理学院2齐齐哈尔医学院病理学院

第一作者：王玉楼(1973-)，男，硕士，主治医师，主要从事肝胆、乳腺疾病方面的研究。