徐太哲，李　丽，王长山

(1.佳木斯市红十字医院，黑龙江 佳木斯 154003；2.佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)



小鼠外周血单个核细胞分离、纯化①

徐太哲1，李丽2，王长山2

(1.佳木斯市红十字医院，黑龙江 佳木斯 154003；2.佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

摘要:目的:探讨小鼠外周血单个核细胞(PBMC)最佳分离条件，提高细胞获得率与纯度，以便后续分子生物学实验。方法:小鼠摘除眼球取血，设置离心力、离心时间、实验环境温度等梯度优化，分别采用EDTA-K2、肝素、枸橼酸钠 抗凝，Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞，直接进行贴壁培养和分析获得率、纯度，计数存活率。结果:Ficoll密度梯度离心法经条件优化后分离的PBMC纯度可达85%，细胞获得率最高可达80%以上，活细胞百分率在92%以上。结论:Ficoll密度梯度离心法在优化条件下可有效地分离PBMC，对后续分子生物学实验无影响。

关键词：小鼠;Ficoll密度梯度离心;PBMC

外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)包括淋巴细胞和单核细胞。是免疫系统的重要组成，是研究免疫老化和衰老的主要依据。研究T、B淋巴细胞首要分离外周血单个核细胞，主要的分离方法是Ficoll-hypaque密度梯度离心法，因血液中各组成成分的沉降系数存在差异，而得以分离[1]。离心后，单个核细胞因与分离液密度相当，集中在血浆层和分层液的界面上，呈白雾层，吸取该层细胞经洗涤离心即获得PBMC。PBMC分离是分子生物学试验常用的技术，其效果直接影响PCR等后续试验结果。实验对象小鼠因体重小，体内血液量少，Ficoll密度梯度离心法正适用这样少量血液的分离，本文探讨小鼠外周血单个核细胞的分离最佳条件。……