门昌平，高振利，吴吉涛，袁贺佳，杨典东，于胜强，王永强，鲁友谊

(青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院泌尿外科，山东烟台　 264000)



·基础研究·

沉默中介体复合物亚基19基因对人膀胱癌细胞UM-UC3迁移能力的影响

门昌平，高振利，吴吉涛，袁贺佳，杨典东，于胜强，王永强，鲁友谊

(青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院泌尿外科，山东烟台 264000)

摘要：目的探讨中介体复合物亚基19(Med19)对人膀胱癌UM-UC3细胞迁移能力的影响及其机制。 方法采用针对Med19的siRNA慢病毒载体转染人膀胱癌UM-UC3，应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹方法(Western blot)检测Med19-siRNA转染组(siRNA)与空载组(NC)Medl9基因表达情况；采用Western blot检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达；采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。 结果Medl9-siRNA慢病毒感染UM-UC3细胞后，转染组Medl9 mRNA表达与空载组相比明显降低，差异有统计学意义(t=10.15，P<0.01)，且转染组Med19、MMP-2和MMP-9蛋白表达明显降低，差异有统计学意义 (t值分别为71.36，26.34，8.627，均P<0.01)，划痕实验和Transwell实验显示转染组细胞迁移能力明显减弱。 结论沉默Med19基因可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达降低人膀胱癌细胞UM-UC3的迁移能力。

关键词：Med19； 慢病毒； RNA干扰； 膀胱癌； 迁移

Med19是中介体复合物(Mediator)的重要组成部分，对于Mediator与RNA聚合酶Ⅱ的结合与活化有着重要作用。在Med19表达被抑制的情况下，Mediator与RNA聚合酶Ⅱ的亲和力降低。Med19作为转录活化基因，对肿瘤的发生、发展具有重要作用，且与胃癌、肝细胞肿瘤、乳腺癌和前列腺癌的发展关系密切[1-2]。为进一步了解Med19对膀胱癌细胞迁移能力的影响，我们采用慢病毒转染的方法抑制人膀胱癌细胞UM-UC3中 Med19的表达，观察细胞迁移能力的变化，并探讨其分子机制。

1资料与方法

1.1材料人膀胱癌UM-UC3细胞株购自上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，UM-UC3细胞培养在含10% 胎牛血清的RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)，培养条件设定为5% CO2，37 ℃。……