杨在君，刘玲玲，2，彭正松

（1.西华师范大学生命科学学院，西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川南充 637009；2.重庆大学生物工程学院，生物流变科学与技术教育部重点实验室，重庆 400044）

盾叶半夏凝集素基因的克隆及功能分析

杨在君1，刘玲玲1，2，彭正松1

（1.西华师范大学生命科学学院，西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川南充 637009；2.重庆大学生物工程学院，生物流变科学与技术教育部重点实验室，重庆 400044）

为克隆盾叶半夏凝集素基因，并对其功能进行分析。采用RACE技术从盾叶半夏中克隆得到盾叶半夏凝集素基因的全长cDNA序列，命名为ppl。同时，构建了ppl基因的原核表达载体，并成功实现了33 kDa重组蛋白在E.coli BL21中的表达。纯化后的重组蛋白PPL用于凝血和体外抗癌试验。该基因的全长cDNA序列为1 504 bp，其中开放性阅读框（ORF）813 bp，编码270个氨基酸，具有3个甘露糖结合识别位点。PPL具有凝血活性，这种凝血活性可受甘露糖抑制。PPL对人鼻咽癌细胞（CNE）、人宫颈癌细胞（Hela）及人乳腺癌细胞（Bcap-37）的生长均具有抑制作用，其中对Hela细胞的抑制效果最好。为进一步研究PPL蛋白的功能奠定了理论基础。

盾叶半夏；凝集素；基因克隆；功能分析

盾叶半夏（Pinellia peltata Pei）为天南星科（Araceae）半夏属（Pinellia）多年生草本植物。直径为1.0～2.5 cm近球形的块茎，叶2～3片，叶片盾状着生，与本属其他任何种都不同；叶片呈深绿色，全缘，卵形或长圆形；浆果卵圆形，锐尖；种子球形。产于浙江温州、文成、福建松政等地，为我国所特有［1］草本植物。目前，盾叶半夏在我国分布数量极少，在《濒危植物红皮书》中被列为濒危（E）级，被我国政府确定为国家二级保护野生植物。……