张　仙，邓　静，常晓霞，杨国淋，马　锐，滑　翔，赵玉佳，欧阳达，文心田,2，黄小波,2,曹三杰,2，文翼平,2，伍　锐,2



应用不对称PCR提高PRRSV-CSFV-JEV共检芯片的杂交效率

张仙1，邓静3，常晓霞1，杨国淋1，马锐1，滑翔1，赵玉佳1，欧阳达1，文心田1,2，黄小波1,2,曹三杰1,2，文翼平1,2，伍锐1,2

1.四川农业大学动物医学院，动物传染病与基因芯片实验室，雅安625014；2.四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心，成都611130；3.四川华神兽用生物制品有限公司，四川畜科生物制品有限公司，成都610299

摘要：目的比较采用普通RT-PCR和不对称PCR分别进行样品的直接荧光标记，应用于cDNA芯片杂交，分析其对芯片杂交效率的影响。方法以本实验室建立保存的重组质粒和病毒为模板，进行不对称RT-PCR引物浓度优化，应用普通RT-PCR与不对称RT-PCR进行直接荧光标记，将标记的产物与制备的cDNA芯片杂交，在相同条件下完成杂交后芯片的洗涤与扫描，记录扫描图片与数据。结果与普通RT-PCR标记方法相比，应用不对称RT-PCR技术标记单链靶基因，能特异有效提高芯片的杂交效率。结论应用不对称RT-PCR技术对样品进行荧光标记后，与cDNA芯片杂交能提高芯片的杂交效率，有利于cDNA芯片的检测应用。

关键词：不对称PCR；cDNA芯片；标记

Supported by the Special Fund for Agro-scientific Research in the Public Interest of China(No. 201203056)

基因芯片技术是近年来新兴起的一种生物高新技术，该技术可以同时定量或定性的检测成千上万个基因信息，具有无选择性、客观、高通量的特点。已有的资料表明随着基因组数据的增多、分子生物学的快速发展，基因芯片技术在疾病诊断[1]、新药开发[2]、基因组研究[3]等生物科学领域中广泛应用。……