孟　双，王　毅，王　艳，叶长芸



环介导等温扩增技术在嗜水气单胞菌检测中的应用

孟双，王毅，王艳，叶长芸

中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，传染病预防控制国家重点实验室，北京102206

摘要：目的建立环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)对嗜水气单胞菌检测的方法，并用临床标本对该方法进行评价。方法根据嗜水气单胞菌desA 基因的保守序列设计特异性引物，利用参考质粒评价该检测体系的灵敏度；用30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性；用粪便模拟样本以及临床样本评价该检测体系的临床检测的可行性。结果LAMP检测体系对嗜水气单胞菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系；LAMP检测体系在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现假阳性；LAMP检测体系在粪便模拟标本中的检测下限为5 × 103 CFU/g；通过与qPCR技术相比较，LAMP具有更高的灵敏度以及更优秀的临床标本的检测能力。结论本研究建立的LAMP方法是首次将LAMP技术运用到了嗜水气单胞菌的检测，所需仪器设备简单，可作为一种快速的筛查方法在临床检验和基层实验室应用。

关键词：嗜水气单胞菌；LAMP；qPCR

Supported by the National Major Science and Technology Project of Prevention and Control in Significant Infectious Diseases(No. 2013ZX10004-101)

嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是一种革兰阴性、能运动、兼性厌氧、氧化酶阳性的杆状细菌，属于弧菌科、气单胞菌属[1]。嗜水气单胞菌广泛分布于自然界的各种水体，是多种水生动物的原发性致病菌，是典型的人-兽-鱼共患病的病原菌。近年来大量研究表明，嗜水气单胞可单独或者与其他致病菌共同感染，引起人类肠胃炎、败血症以及外伤引起软组织感染等病症[2]，危害食品安全，并且是免疫缺陷病人和肝功能疾病患者的条件致病菌，具有重要的公共卫生意义[3-4]。……