王　沂,赵俊暕，余　源,田喜凤,李　冀,刘晓莉,周英斌,李少东,王　洋



蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶的表达纯化和活性鉴定

王沂1,赵俊暕1，余源2,田喜凤2,李冀2,刘晓莉2,周英斌2,李少东2,王洋2

1.华北理工大学附属医院检验科，唐山063000；2.华北理工大学生命科学学院，唐山063000

摘要：目的克隆、原核表达蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia，贾第虫)的胞外核酸酶编码区，并对其蛋白产物进行活性鉴定。方法对贾第虫胞外核酸酶(GeNuc)蛋白进行生物信息学分析，根据分析结果以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得GeNuc去信号肽段编码区序列，双酶切连入原核表达载体pET-28a(+)，将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3)，经IPTG诱导表达融合蛋白，SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物。Ni-NTA亲和层析纯化GeNuc蛋白，经复性后验证其对质粒DNA的水解能力。结果成功克隆了长约800 bp的GeNuc编码区并构建了原核表达载体pET-28a(+)-GeNuc，测序结果显示C2株GeNuc序列与WB株相同；在大肠杆菌中诱导表达获得了相对分子量约30.8 kDa的融合蛋白；复性后的纯化GeNuc蛋白具有降解双链DNA的能力，但活性较商品化DNaseⅠ低。结论证明了GeNuc的存在，为GeNuc抗体的制备及贾第虫致病机制的研究提供了实验材料。

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫；胞外核酸酶；生物信息学；原核表达；活性鉴定

Supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 31471954), and the Hebei Province Science Foundation for Youths (No. C2012401039)

蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia，简称贾第虫)属于动鞭毛纲、双滴虫目、六鞭毛科、贾第虫属，是一种全球分布的机会致病性原虫，被认为是目前已知的最原始真核细胞，也是生物学研究中重要的模式生物。贾第虫生活史简单，仅包括两个阶段，即具有感染能力的包囊和具有运动和繁殖能力的滋养体。……