汪　凯，刘　浩，李文超，顾有方*

(1.安徽科技学院　动物科学学院，安徽　凤阳　233100；2. 凤阳县畜牧兽医局，安徽　凤阳　233100)



猴源溶组织内阿米巴原虫巢式PCR检测方法的建立

汪凯1，刘浩2，李文超1，顾有方1*

(1.安徽科技学院动物科学学院，安徽凤阳233100；2. 凤阳县畜牧兽医局，安徽凤阳233100)

摘要：目的:建立猴源溶组织内阿米巴原虫巢式PCR 检测方法并初步应用于临床检测;方法:根据溶组织内阿米巴原虫16S rDNA基因序列，设计1 对阿米巴属原虫保守引物和1 对溶组织内阿米巴原虫特异性引物，建立猴源溶组织内阿米巴原虫巢式PCR 检测方法，摸索出了该检测方法的最佳反应条件，进了行特异性和敏感性试验，并对96份猕猴粪便样品进行检测;结果:该巢式PCR方法能特异性地扩增出猴源溶组织内阿米巴原虫目的片段，与莫氏内阿米巴、波氏内阿米巴、迪斯帕内阿米巴、大肠内阿米巴、微小隐孢子虫等11种相关原虫基因组DNA 无交叉反应；最低能检测到0.3 fg的阳性参照DNA；对临床样品检测结果表明该PCR技术检查阳性者显微镜检查均为阳性;结论:建立的巢式PCR方法具有高度的特异性和敏感性，对于溶组织内阿米巴原虫病的诊断和流行病学调查具有重要的应用价值。

关键词：溶组织内阿米巴原虫；猴；巢式PCR；检测

溶组织内阿米巴(Entamoebahistolytica) 又称痢疾阿米巴，是引起阿米巴性结肠炎和肠外脓肿的病原体[1]。全世界约有5 000 万人感染，每年导致10万人死亡[2]，其死亡率在原虫寄生虫病患者中仅次于疟疾[3]。

E.histolytica在猕猴、猩猩和狒狒等非人灵长类动物肠道内感染均较为普遍[4]，尤其是最近报道显示E.histolytica在菲律宾食蟹猴群中高度流行[5]。……