劳秀杰，王静静，郑东霞，邵春艳，何海建，王晓洁，王志亮，王晓杜，宋厚辉（.浙江农林大学动物科技学院，浙江杭州 00；.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 660；.金华职业技术学院农业与生物工程学院，浙江金华 007）



猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

劳秀杰1，王静静2，郑东霞2，邵春艳1，何海建3，王晓洁1，王志亮2，王晓杜1，宋厚辉1
（1.浙江农林大学动物科技学院，浙江杭州 311300；2.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；3.金华职业技术学院农业与生物工程学院，浙江金华 321007）

摘 要：根据GenBank报道的N基因高度保守核苷酸序列，设计并合成一对引物。上下游引物与GenBank中登录的153株猪流行性腹泻病毒（PEDV）N基因全长序列匹配度分别是100%和97%。以本实验室分离流行毒株为模板，利用SYBR Green I荧光染料法进行RT-PCR扩增，获得扩增产物构建重组质粒作为阳性对照，建立检测猪流行性腹泻病毒核酸的方法。同一样品进行3次重复试验，变异系数＜0.9%。通过对临床样品进行检测和测序验证，核酸检测结果中的阳性样品准确率为100%。本研究所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、准确等优点，可用于临床PEDV的检测及分子流行病学调查。

关键词：猪流行性腹泻病毒；N基因；实时荧光定量RT-PCR；检测

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起猪的一种高度接触性肠道传染病，其特征为呕吐、腹泻、脱水［1］。本病主要发生在当年12月至次年2月，夏季也可发生，可以感染各年龄阶段的猪，其中哺乳仔猪最易感，发病率可达100%，平均死亡率可达50%。……