徐皓++秦公伟++王哲

摘要：建立了1种简便快速的毛细管气相色谱质谱联用方法，分析不同产地延胡索中有机氯、拟除虫菊酯农药残留，并对样品中农药提取净化的方法进行比较研究。结果表明：净化柱中不添加活性炭，农药残留检出种类和检出效果好，13个不同产地的延胡索均符合绿色中药标准。

关键词：延胡索；有机氯农药；拟除虫菊酯；气相质谱联用

中图分类号： TQ450.2+63文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）05-0355-04

延胡索（Corydalis yanhusuo W. T. Wang）别称元胡、延胡、玄胡，为罂粟科（Papaveraceae）多年生草本植物延胡索的干燥块茎，其块茎入药，有活血散瘀、理气止痛的作用[1]。延胡索含多种生物碱，其中延胡索乙素、延胡索丑素为止痛、镇静的主要成分。延胡索主要分布于浙江、江苏、安徽、陕西等地，其中浙江东阳、磐安、缙云、永康等地，以及江苏南通地区的栽培面积最大，近年来陕西汉中的栽培面积也不断扩大[2]。

我国是中药材生产大国，然而中药产品的总出口额却仅占世界药品销售量的1%，其中一个重要的原因即是农药残留问题。目前较常用的农药品种主要有有机磷类、有机氯类、拟除虫菊酯类和氨基甲酸酯类[3]。有机氯农药脂溶性强，难降解，极易造成土壤、水体和空气的污染，并通过食物链富集而影响人类健康[4]。虽然有机氯农药已被禁用，但目前在中药材中仍有检出[5-11]。拟除虫菊酯类农药与有机氯农药相比具有高效、低毒、低残留等优点，是一类广谱杀虫剂，在近些年的中草药检测中发现，该类农药的残留水平也较高，这将使我国的中草药现代化和国际化发展严重滞后，并危害广大消费者的健康[12]。

本研究采用气相色谱质谱串联检测并分析比较13个不同产地延胡索中含有机氯、拟除虫菊酯农药的种类和含量，以期考察它们是否符合绿色中药标准，为13个不同产地延胡索的用药安全提供参考。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

TRACE GC Ultra气相色谱仪（美国赛默飞公司）；ITQ900质谱仪（北京欧倍尔科学仪器有限公司）；DB-17MS石英毛细管柱（60 m×0.25 mm×0.25 μm，美国Agilent公司）；KSW-12D-11马弗炉（沈阳市节能电炉厂）；THZ-82水浴恒温振荡器（常州国华电器有限公司）；ME104E电子天平（美国梅特勒公司）；MTN-2800D氮吹仪（北京花蕊博远科技发展有限公司）；101-3型电热鼓风干燥箱（郑州宏朗仪器设备有限公司）。

18种有机氯和拟除虫菊酯混标：α-六六六（α-BHC）、五氯硝基苯（quintozene）、γ-六六六（γ-BHC）、环氧七氯（heptachlor epoxide）、β-六六六（β-BHC）、δ-六六六（δ-BHC）、p，p′-滴滴伊（4，4′-DDE）、o，p′-滴滴伊（0，4′-DDE）、p，p′-滴滴滴（4，4′-DDD）、p，p′-滴滴涕（4，4′-DDT）、联苯菊酯（bifenthrin）、甲氰菊酯（fenpropathrin）、三氟氯氰菊酯（cyhalothrin）、氯菊酯2（permethrin）、氟氯氰菊酯3（cyfluthrin）、氯氰菊酯3（cypermethrin）、氰戊菊酯2（fenvalerate）、溴氰菊酯（deltamethrin），购自ULTRA公司（每支100 μg/mL）；石油醚、乙酸乙酯、无水硫酸钠为分析纯；超纯水；弗罗里硅土（于550 ℃灼烧4 h后备用，用前于140 ℃烘2 h，趁热加5%水灭活）。

1.2试验材料

试验材料为2012年4月初采挖的干燥药材，购于药材市场。产地分别为湖南新化（Y1）、辽宁清原（Y2）、浙江仙居（Y3）、浙江东阳（Y4）、浙江磐安（Y5）、 汉中城固（Y6）、山东泰安（Y7）、安徽亳州（Y8）、河南辉县（Y9）、吉林通化（Y10）、黑龙江绥化、（Y11）、湖北郧西（Y12）、广西河池（Y13）。

1.3试验方法

1.3.1提取方法准确称取10.0 g延胡索样品于100 mL具塞三角瓶中，加入20 mL石油醚溶液，将三角瓶放入30 ℃水浴恒温振荡器中振荡30 min以提取农药残留；完成后将提取液用添加有无水硫酸钠的漏斗过滤到50 mL具塞三角瓶中，在100 mL具塞三角瓶中再次加入10 mL石油醚，在水浴恒温振荡器中振荡30 min，过滤、合并2次提取液；在60 ℃干燥箱中浓缩至2 mL左右，待净化[13]。

1.3.2样品农药的净化方法分别对13个延胡索样品进行提取和浓缩处理。方法1：用20 mL石油醚活化装有1 g无水硫酸钠、5 g弗罗里硅土、1 g无水硫酸钠的小柱，将已浓缩的提取液倾倒入毛细管柱内，用20 mL石油醚-乙酸乙酯（体积比85 ∶15）淋洗小柱，将淋洗液收集于20 mL离心管中，于60 ℃用氮吹仪浓缩至1 mL以下，用石油醚定容至1 mL，供气相色谱测定。

方法2：在装柱过程中按照“1 g无水硫酸钠、5 g弗罗里硅土、0.5 g活性炭、1 g无水硫酸钠”的顺序填装。试验过程与方法1相同。

准确称取4份混合延胡索样品，每份10.0 g，分别加入各组分浓度约为1 μg/mL的农药混合标准使用液100 μL。分别根据方法1、方法2对样品中的有机氯、拟除虫菊酯农药进行提取和净化，进行方法比较研究。

1.3.3气相色谱条件色谱柱：DB-17MS石英毛细管柱（60 m×0.25 mm×0.25 μm）；色谱柱温度：40 ℃，保持1 min，然后以30 ℃/min程序升温至130 ℃，再以5 ℃/min升温至250 ℃，最后以10 ℃/min升温至300 ℃，保持5 min；载气：氦气，纯度≥99.99%，流速1.2 mL/min；进样口温度：290 ℃；进样量：5 μL，无分流进样，1.5 min后打开阀；电子轰击源：70 eV；离子源温度：230 ℃；GC-MS接口温度：280 ℃。选择离子监测：每种化合物分别选择1个定量离子、2～3个定性离子。每组所有需要检测离子按照出峰顺序，分时段分别检测。

2结果与分析

2.1标准品的制备

取浓度20 μg/mL的农药储备液：0.25 mL 8种有机氯混标、0.2 mL五氯硝基苯、0.6 mL氯菊酯2、0.5 mL氰戊菊酯3、0.5 mL 甲氰菊酯、0.5 mL氯氰菊酯2、0.2 mL三氟氯氰菊酯、0.5 mL 溴氰菊酯、0.5 mL联苯菊酯、0.5 mL氟氯氰菊酯3，用正己烷定容至5 mL容量瓶中，得到浓度为1 μg/mL的使用液。

2.2标准品色谱-质谱的条件

2.2.1单个标准品的色谱-质谱条件选择将浓度为 20 μg/mL 的18种农药标品单标分别进样，每次进样量 1 μL，获得每种农药标准品在“1.3.3”节色谱条件下的保留时间（RT）。18种有机氯、拟除虫菊酯农药的名称、美国化学文摘社（CAS）号、各自的保留时间及依据单种标准品各离子碎片在谱库、仪器中响应选择的特征离子见表1。

2、3表示该农药有2个或3个同分异构体。

2.2.2混和基质标准品的色谱-质谱条件选择采用相同的选择性离子检测（SIM）起始时间，将浓度为1 μg/mL的18种有机氯、拟除虫菊酯类农药基质混标进样5 μL，确定准确的保留时间，并依据离子强度和基质背景从特征离子中选出定量离子，其余3个离子则为定性离子。18种有机氯、拟除虫菊酯农药基质混标中各组分的保留时间和定量离子见表2，基质混标总离子流见图1。

2.3样品中农药残留的测定

样品提取、净化后，加入50 μL内标溶液，定容至1 mL，每次进样量5 μL，每个样品进样3次，得到不同产地中有机氯、拟除虫菊酯农药残留定量离子的积分面积（表3）。药残留结果表明：7个产地延胡索（Y1、Y2、Y3、Y5、Y9、Y10、Y13）样品中，虽然有氯菊酯2、氰戊菊酯2种有机氯农药残留检出，但含量及其微小，氯菊酯含量﹤0.025 0 mg/kg、氰戊菊酯含量均 ﹤0.050 0 mg/kg，未超出绿色农药标准。

根据相应公式计算农残含量[14]，计算结果扣除空白值。

3讨论

本试验在方法1用20 mL石油醚活化装有1 g无水硫酸钠、5 g弗罗里硅土、1 g无水硫酸钠的小柱，方法2是在GB/T 5009.146—2008《植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定》基础上加以改进的新方法，在弗罗里硅土小柱中添加了活性炭。弗罗里硅土可以吸附极性化合物，如颜料和其他干扰成分，弗罗里硅土干扰化合物保留的相互作用主要是由于它们之间的极性官能团，如氢键的作用[15]。层析柱采用单一填料弗罗里硅土，洗脱液颜色较深，而添加活性炭可以明显减少洗脱液颜色，简化了操作步骤，减少了试剂的用量；但与不加活性炭的检测结果相比，农药残留量较少。这是由于活性炭吸附作用太强，使农药洗脱不完全[13]，一部分表3不同产地中有机氯、拟除虫菊酯农药残留定量离子的积分面积残留在层析柱上导致含量偏低。虽然加标混样中农药检出的种类较少，但在方法比较中可以明显发现添加活性炭后，其对农药具有较强的吸附能力。因此可知，没有添加活性炭的试验方法优于添加活性炭的试验方法。通过对13个不同产地延胡索样品的进样分析可知，所有样品均未超出绿色农药标准。参考文献：

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