孙晓波，苏家乐，贾新平，梁丽建，肖　政，邓衍明

（江苏省农业科学院园艺研究所/江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室，南京 210014）



盐地碱蓬2个DREB1/CBF基因的克隆与表达调控分析

孙晓波，苏家乐，贾新平，梁丽建，肖政，邓衍明

（江苏省农业科学院园艺研究所/江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室，南京 210014）

摘要：【目的】从盐地碱蓬（Suaeda salsa L.）中克隆2个DREB1/CBF，分析其序列特征、编码蛋白的亚细胞定位和转录激活活性，以及在非生物胁迫下的表达模式，为进一步研究盐地碱蓬的抗逆机制提供依据。【方法】利用同源克隆法获得盐地碱蓬2个DREB1/CBF片段，采用RACE技术克隆获得cDNA全长序列，分别命名为SsCBF1 和SsCBF2。运用生物信息学软件对2个SsCBF及其编码蛋白进行分析，并将它们分别与GFP融合构建植物表达载体，通过基因枪转化法导入洋葱表皮细胞进行瞬时表达，观察它们编码蛋白的亚细胞定位。利用酵母单杂交系统研究2个SsCBF与DRE/CRT顺式作用元件的结合特异性和转录激活活性。采用Real time-PCR研究2个SsCBF在低温、NaCl、PEG以及ABA处理下的表达模式。【结果】 SsCBF1编码一个225个氨基酸的蛋白，预测分子量为25.4 kD，理论等电点为4.84。SsCBF2编码一个由260个氨基酸组成的蛋白，预测分子量为28.6 kD，理论等电点为5.05。SsCBF1和SsCBF2均含有1个典型的AP2/ERF保守结构域，在核苷酸和氨基酸水平上分别具有53.5％ 和45.4％的同源性，而2个基因的AP2/ERF结构域在核苷酸和氨基酸水平上分别具有76.2％和 87.3％的相似性。SsCBF1、SsCBF2归属于DREB亚组的A-1组，定位于细胞核内，均能与DRE/CRT顺式作用元件特异性结合，并激活下游报告基因的表达。低温、干旱、高盐和ABA能够诱导SsCBF1表达，而SsCBF2在低温处理下表达量上调，但对干旱、高盐和ABA处理不响应。……