聂瑞强，杨玉静，谢建山,2，范瑞文，高文俊，董常生

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2山西医科大学基础医学院，太原030001）



黑色素细胞中过量表达Pax610Neu基因对MITF和TYR的影响

聂瑞强1，杨玉静1，谢建山1,2，范瑞文1，高文俊1，董常生1

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2山西医科大学基础医学院，太原030001）

摘要：【目的】 MITF和β-catenin是黑色素生成通路中重要的调节基因，而Pax6通过调控MITF和β-catenin来调控黑色素细胞的黑色素生成，通过对只含有正常Pax6 paird domain 的前102个氨基酸的Pax610Neu的研究，来探究Pax610Neu是否还有生物学功能，以及Pax6对其下游基因的作用机理。【方法】根据NCBI查找到的Pax610Neu基因序列设计PCR引物，克隆Pax610Neu，收集所得基因片段送华大基因测序确认。后通过对Pax610Neu和慢病毒表达载体的序列分析来筛选合适的酶切位点，通过分析选取Sal I和Xba I作为酶切位点，设计含有Sal I和Xba I酶切位点的PCR引物，大量克隆Pax610Neu基因，从而通过胶回收得到含有Sal I和Xba I酶切位点的Pax610Neu基因。将含有酶切位点的目的片段与T载体相连，并送华大基因测序。将与T载体连接成功的质粒导入感受态细胞使其大量扩增，提取质粒，双酶切后，胶回收，得到大量含有Sal I和Xba I酶切位点的Pax610Neu基因片段，将其与含有小鼠tyrp2特异性启动子和绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒表达载体相连接，送华大基因测序确认。将连接好的慢病毒表达载体导入感受态细胞使其大量扩增，通过质粒中提试剂盒获得大量去内毒素的Pax610Neu慢病毒真核表达载体。将慢病毒真核表达载体通过细胞转染导入到培养的绵羊黑色素细胞中，使其过量表达。……