赵攀登，董建国，邓同炜，陈　益，徐耀辉，蒋增海，卢建洲，王晓晔，王　岩*

(1.河南牧业经济学院 动物医学院，河南郑州 450046；2.信阳农林学院 牧医工程学院，河南信阳 464000；3.广西大学 动物科学技术学院，广西南宁 530004)



共表达猪流行性腹泻病毒S1与GM-CSF蛋白重组腺病毒的构建

赵攀登1，董建国2，邓同炜1，陈益1，徐耀辉1，蒋增海1，卢建洲1，王晓晔3*，王岩1*

(1.河南牧业经济学院 动物医学院，河南郑州 450046；2.信阳农林学院 牧医工程学院，河南信阳 464000；3.广西大学 动物科学技术学院，广西南宁 530004)

摘要：为构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1与GM-CSF融合基因的重组腺病毒，通过FMDV的2A基因序列做为Linker将密码子优化的S1基因和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因连接。构建重组穿梭质粒pShuttle-GM-CSF 2A-S1(m)，并将其电转化至含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠埃希菌BJ5183感受态细胞中，通过同源重组制备重组腺病毒质粒pAd-GMCSF2A-S1(m)。重组腺病毒质粒经PacI线性化后转染HEK-293A细胞，获得重组腺病毒rAd- GMCSF2A-S1。间接免疫荧光和Western blot结果显示，S1和GMCSF蛋白在重组腺病毒感染的HEK-293A细胞中获得表达。该重组腺病毒的制备为PEDV重组活载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒；S1基因；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；重组腺病毒

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水为特征的一种肠道急性传染病[1]。自2010年冬天开始，PED在中国大范围流行，此次暴发具有感染性强、流行性广、致死率高、不易防控等特点，给我国的养猪业带来了巨大的经济损失[2]。

PEDV属于冠状病毒，是有囊膜的单股正链RNA病毒[3]。……