王庆华，王生存，李　斌，刘　春，吴刘成，王　旭，邵义祥*

(1.南通大学实验动物中心，江苏南通 226001； 2.南通大学附属医院儿科，江苏南通 226001)



蛋白磷酸酶2A催化亚基α在小鼠胚胎成纤维细胞迁移中的作用研究

王庆华1，王生存1，李斌2，刘春1，吴刘成1，王旭1，邵义祥1*

(1.南通大学实验动物中心，江苏南通 226001； 2.南通大学附属医院儿科，江苏南通 226001)

摘要：利用体外基因敲除技术检测小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts，MEFs)周期和迁移能力的变化，探究蛋白磷酸酶2A的Cα亚基在MEFs细胞迁移过程中的作用。用Cαfl/fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对，取E12.5 d的胚胎制作小鼠胚胎成纤维细胞。利用表达Cre重组酶(Ad-Cre-EGFP)以及GFP荧光蛋白(Ad-EGFP)的腺病毒载体，对P3代MEFs进行感染，分别用PCR，RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时利用流式分选技术检测感染后MEFs的细胞周期的变化，利用细胞划痕试验检测了其细胞迁移能力的变化。结果显示，胰酶消化的方法成功获得了小鼠胚胎成纤维细胞，DNA，RNA和蛋白水平的鉴定获得了3对3的野生型和基因敲除MEFs。流式分选发现Ad-Cre处理的MEFs与Ad-EGFP处理的MEFs相比，处于G2期的细胞比例为30.8%±2.57%，高于Ad-EGFP MEFs的23.9%±2.46%，并且细胞碎片的比例也远高于后者。划痕试验表明，Cα亚基缺失后细胞迁移能力下降，12 h就显著低于对照组。结果表明，腺病毒携带的Cre重组酶能够在体外有效地敲除掉MEFs中的蛋白磷酸酶2A的Cα亚基，PP2A Cα亚基的缺失会导致MEFs细胞周期倾向于阻滞在G2期，并会降低细胞迁移的能力。

关键词：蛋白磷酸酶2A；小鼠胚胎成纤维细胞；细胞迁移；细胞周期

细胞迁移在多个生命过程中发挥着重要的作用，例如胚胎发育、血管生成、神经生长、组织修复、炎症反应、动脉粥样硬化、关节炎、骨质疏松症以及侵袭和转移过程。……