范燕茹，金 鑫，田巧珍，张 曼，刘 骄，杨银凤*



植物乳杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD－1表达的信号通路途径初探

范燕茹1，2，金 鑫1，2，田巧珍1，2，张 曼1，2，刘 骄1，2，杨银凤1，2*

（1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特010018；2.农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特010018）

摘 要：本试验旨在探索乳酸杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD－1表达的可能途径。采用实时荧光定量PCR（RT－qPCR）的方法，对已建立的诱导SBD－1表达模型中Toll样受体2（Toll like receptor 2，TLR2）及其相关因子的基因表达变化进行检测；然后选用3种信号通路抑制剂，即NF－κB信号通路抑制剂PDTC、ERK 1/2信号通路抑制剂PD98059和JNK信号通路抑制剂SP600125，将细胞分为8组：细胞组：不作处理；阳性对照组：只添加植物乳杆菌P－8（L.plantarum P－8）诱导；PDTC组：只添加PDTC预处理细胞（PDTC）；PDTC＋L.plantarum P－8组：PDTC ＋L.plantarum P－8诱导；PD98059组：PD98059；SP600125组：SP600125；PD98059＋L.plantarum P－8组：PD98059＋L.plantarum P－8；SP600125＋L.plantarum P－8组：SP600125＋L.plantarum P－8。采用RT－qPCR的方法检测各组SBD－1mRNA表达水平。结果表明，绵羊瘤胃上皮细胞被L.plantarum P－8诱导后，TLR2及其转接蛋白MyD88、NF－κB和ERK1/2、JNK各基因的mRNA水平都较空白组细胞内的表达极显著增加（P＜0.01）；添加抑制剂后再诱导，发现抑制剂PD98059和SP600125均能极显著（P＜0.01）抑制细胞内SBD－1mRNA的表达，而PDTC仅能显著抑制（P＜0.05）SBD－1的表达。结果表明，L.plantarum P－8可促进绵羊瘤胃上皮细胞TLR2、MyD88、NF－κB、JNK和ERK1/2基因的mRNA表达；添加NF－κB信号通路抑制剂PDTC、ERK 1/2信号通路抑制剂PD98059和JNK信号通路抑制剂SP600125，可抑制L.plantarum P－8对SBD－1mRNA的诱导作用。综上表明，L.plantarum P－8有可能通过激活绵羊瘤胃上皮细胞内NF－κB、JNK、ERK1/2等信号通路促进SBD－1的表达。

关键词：β－防御素－1；瘤胃上皮细胞；乳酸杆菌；Toll样受体2；实时荧光定量PCR

抗菌肽（Antimicrobial peptides，AMPs）是广泛存在于生物体内的一种具有强抗菌作用的阳离子多肽，由于其独特的抗菌机制，病原微生物不易对其产生耐药性［1－2］。……