胡　蕾,刘　莉,张　霜,杜芳腾,张吉翔

(南昌大学第二附属医院消化内科/江西省分子医学重点实验室，南昌 330006)



siRNA抑制HMGA1基因表达对LX-2细胞生物学功能的影响*

胡蕾,刘莉,张霜,杜芳腾△,张吉翔

(南昌大学第二附属医院消化内科/江西省分子医学重点实验室，南昌 330006)

[摘要]目的探讨高迁移率蛋白A1(HMGA1)siRNA对人肝星状细胞HMGA1、α-SMA、E-钙黏素(E-cadherin)基因的表达调控作用及增殖活性的影响，并探讨其可能的机制。方法将有效的人工合成的HMGA1 siRNA转染人肝星状细胞LX-2(LX-2)后沉默HMGA1基因的表达。通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LX-2细胞中HMGA1、α-SMA和E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测LX-2细胞增殖水平。结果以HMGA1-siRNA序列1组沉默效果最好。TGF-β1刺激组与TGF-β1+NC-siRNA组之间细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA、E-cadherin的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA表达均明显高于正常对照组(P<0.05)，E-cadherin表达显著低于正常对照组(P<0.05)；TGF-β1+HMGA1 siRNA组细胞增殖水平及HMGA1、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平较另外3组均显著下降(P<0.05)，E-cadherin表达水平显著增高(P<0.05)。结论靶向HMGA1的siRNA能够沉默LX-2中HMGA1的表达；抑制TGF-β1诱导的LX-2增殖水平，提示HMGA1参与了TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。

[关键词]高迁移率蛋白A1；RNA干扰；肝星状细胞；肝纤维化

肝纤维化是在各种致病因素作用下肝脏内纤维结缔组织异常增生的代偿反应，其本质是肝脏组织内细胞外基质合成大于降解[1]。研究表明某些干预措施如促进细胞外基质降解可促使肝纤维化进程逆转[2]。肝损伤过程中，肝星状细胞被激活发生表型转化后能够获得肌成纤维细胞特性，进而增加细胞收缩性和胶原合成，这种过程受多种细胞因子调控。Shimada等[3]用纤维化过程中的重要转化刺激因子(transforming growth factor-β1，TGF-β1)诱导24 h来激活人肝星状细胞LX-2(hepatic stellate cell LX-2，LX-2)来构建体外肝纤维化实验模型。高迁移率族蛋白A1(high mobility group AT-hook 1，HMGA1)是高迁移率族蛋白中一员，作为转录因子的辅助因子参与真核生物的转录过程[4]。文……