胡卉华 许 凌 徐海鹏 林 根 王 强 何志勇 林 动 林景辉（福建省肿瘤医院胸部肿瘤内科，福建 福州 350000）



TRAF6基因表达与非小细胞肺癌EGFR突变患者临床EGFR-TKIs治疗疗效的关系

胡卉华 许 凌 徐海鹏 林 根 王 强 何志勇 林 动 林景辉
（福建省肿瘤医院胸部肿瘤内科，福建 福州 350000）

【摘要】目的 探讨TRAF6表达与EGFR突变NSCLC患者EGFR-TKIs治疗疗效的相关性。方法 对64份NSCLC病理组织标本分别进行免疫组化检验，测定TRAF6及NF-κB-p65表达，观察其相关性并分析对远近期预后疗效的影响。结果 TRAF6基因扩增后，NF-κB-p65活化率明显提高，但近期总有效率与PFS显著降低，组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 TRAF6基因扩增与NF-κB组成性活化具有正相关性，可影响EGFR突变NSCLC患者EGFR-TKIs治疗的远近期疗效。

【关键词】非小细胞肺癌；EGFR-TKIs；TRAF6；NF-κB

目前，表皮生长因子受体络氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）被认为是表皮生长因子受体（EGFR）活性突变非小细胞肺癌患者基金项目：福建省卫生厅青年课题2013-2-8；国家临床重点专科建设项目资助

（NSCLC）的有效治疗方式[1]，本研究针对EGFR突变NSCLC患者开展肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）检验，分析TRAF6与核因子-κB（NF-κB）组织性活化、EGFR-TKIs治疗近期疗效及无进展生存时间（PFS）的相关性，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料：选取2010年1月至2012年1月本院收治的NSCLC患者64例，其纳入标准为：①组织病理诊断获得确诊，均为腺癌，并将其手术切除病理组织标本作为实验材料；②存在EGFR活性突变；③手术前均未给予EGFR-TKIs治疗。64例患者中男性36例，女性28例，年龄46～74岁，平均（59.6±4.9）岁。

1.2 方法：鼠抗人TRAF6单克隆抗体（SANTA CRUZ）、研究试剂包括鼠抗人NF-κB-p65单克隆抗体（CST）、免疫组化试剂盒（VECTOR）。采用免疫组化法测定TRAF6与NF-κB-p65表达，常规免疫组化染色，阴性对照为PBS替代一抗，内参照阳性对照为淋巴细胞阳性染色。免疫组化试剂A液中加入3% H2O2，孵育10 min，PBS冲洗；B液孵育10 min，加入一抗待检，加入二抗孵育10 min，PBS冲洗；D液孵育10 min，PBS冲洗，DAB显色，苏木素衬染。TRAF6测定标准为：阳性细胞染色程度为无染色计1分、轻度染色计2分、中度染色计3分、高度染色计4分，染色细胞数量占比≤25%计1分，占比为26%～50%计2分，占比为51%～75%计3分，占比＞75%计4分，合计分值2分为阴性，3～5分为弱阳性，4～6分为阳性，7～8分为强阳性。NF-κB-p65测定标准为：阳性细胞染色程度为无染色计0分，强度低于内参照染色计1分，强度相似于内参照染色计2分，强度高于内参照染色计3分，阳性染色细胞数量＞50%且染色程度评分为2～3分为组织性活化。

1.3 疗效标准：临床近期疗效参照RECIST1.1评价标准，包括完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、病变稳定（SD）与病变进展（PD），其中CR+PR为总有效率，PFS为EGFR-TKIs治疗首日至病情进展与死亡的时间。

1.4 统计学方法：采用SPSS 19.0统计学软件，计量资料以（±s）表示，行单因素方差检验，P<0.05为具有统计学意义。

2 结 果

伴随TRAF6基因表达增强其NF-κB-p65活化率明显提高（表1），但近期总有效率显著降低（表2），自TRAF6阴性患者PFS为（24.3±3.7）个月，弱阳性患者PFS为（19.2±4.1）个月，阳性患者PFS为（12.8±3.3）个月，强阳性患者PFS为（8.4±2.9）个月（图1）。其NF-κB-p65活化率与远近期疗效组间比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。

表1 不同TRAF6表达患者NF-κB-p65活化及远近期疗效比较

表2 不同TRAF6表达患者近期疗效比较[n（%）]

图1 不同TRAF6表达患者PFS分布

3 讨 论

目前，大量临床研究均已证实EGFR活性突变是影响NSCLC患者采用EGFR-TKIs治疗的有效预测分子标志物，其临床治疗有效率高达70%～80%，使得EGFR-TKIs在NSCLC患者临床治疗中受到广泛认可[2]，部分报道已指出该种方式为EGFR活性突变NSCLC患者的一线治疗方案[3]。但在EGFR-TKIs治疗中NF-κB组成性活化会严重影响其预后疗效，新近研究表示TRAF6为NF-κB中上游信号分子，且NSCLC患者经常存在TRAF6扩增情况，促使NF-κB组成性活化而影响EGFR-TKIs治疗效果[4]。TRAF6主要为泛素连接酶，是NF-κB信号途径中关键上游信号分子，对细胞质内诸多功能信号起到接头作用，可决定细胞内功能信号开启，介导信号分子活化从而影响NF-κB组成性活化[5-6]。王敏等[7]研究通过PCR技术扩增TRAF6截短体编码基因，经荧光素酶报告表现TRAF6可增强NF-κB信号通路，从而影响NF-κB活化。 本次研究中针对64例EGFR突变NSCLC组织标本开展了TRAF6与NF-κB检验，通过结果观察可见TRAF6表达增强后其NF-κB-p65活化率也显著升高；同时，伴随TRAF6表达逐渐增强患者的近期总有效率与PFS均显著降低。证实TRAF6基因扩增与NF-κB组成性活化具有正相关性，可影响EGFR突变NSCLC患者EGFR-TKIs治疗的远近期疗效，TRAF6基因扩增可作为EGFR-TKIs疗效的不良预测因子。根据研究结果分析，笔者认为TRAF6基因可作为EGFR突变患者EGFR-TKIs临床疗效的重要不良预测因子，临床开展EGFR-TKIs治疗时可首先筛查TRAF6扩增情况，以积极促进NSCLC患者的临床治疗效果。

综上所述，TRAF6基因扩增可增强NF-κB组成性活化，进而对EGFR突变NSCLC患者行EGFR-TKIs治疗的远近期疗效均有影响。

参考文献

[1] 黄晓明,孙建立,宋晨菲.养阴解毒法在中医药结核EGFR-TKI治疗晚期非小细胞肺癌中的思路探讨[J].时珍国医国药,2015,26 (7):1706-1708.

[2] 张龙富,张新.EGFR抑制剂在非小细胞肺癌中的应用[J].上海医药,2015,36(15):14-18.

[3] 谢丽,禹立霞,刘宝瑞,等.老年非小细胞肺癌患者血浆突变与EGFR-TKI疗效研究[J].实用老年医学,2015,29(8):666-668.

[4] 刘宇晶,刘畅,龙彦,等.非小细胞肺癌患者治疗前后血清CEA和CYFRA21-1水平与EGFR突变及EGFR-TKI疗效的关系[J].中华检验医学杂志,2015,38(6):407-411.

[5] Liang YC,Wu HG,Xue HJ,et al.Resistance to Gefitinib of Human Lung Adenocarcinoma H1975 Cells[J]. of Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2013,33(6):845-851.

[6] Qin BM,Chen X,Zhu JD,et al.Identification of EGFR kinase domain mutations among lung cancer patients in China:implication for targeted cancer therapy[J].Cell Research,2005,15(3):212-217.

[7] 王敏,王晓辉,唐刘君,等.TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通道的影响[J].安徽医科大学学报,2011,46(11):1113-1116.

中图分类号：R734.2

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）09-0029-02