陈　曦，汤　承，张　斌，宋志刚，周　芳，岳　华

(西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041)



牦牛星状病毒的RT-PCR检测方法的建立和变异分析

陈曦，汤承，张斌，宋志刚，周芳，岳华*

(西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041)

近期作者实验室从腹泻牦牛粪便样本中鉴定出一种新型星状病毒(AstV)——牦牛AstV，本研究旨在建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。首先设计引物扩增牦牛AstV 630 bp的ORF2基因片段，进行序列分析；在此基础上设计检测引物，建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。结果显示，从20份牦牛腹泻粪便中扩增出13个牦牛AstVORF2基因片段，核苷酸相似性为99.3%～100%，而与牛肠源星状病毒(BAstV)ORF2基因的相似性仅为59.5%～80.8%；所建立的RT-PCR方法只扩增牦牛AstV的特异片段，对BAstV和其他无关病原无扩增；对病毒核酸的最低检测限为57.3 fg·μL-1；比较试验表明，所建立的RT-PCR方法对牦牛AstV的检出率明显优于现有检测BAstV的RT-PCR方法。其对牦牛腹泻与健康粪便样本中牦牛AstV的检出率分别为55.5%(76/137)和7.7%(2/26)(P<0.01)。试验结果表明，扩增的ORF2基因片段的核苷酸序列在牦牛AstV毒株间高度保守，但相对于BAstV变异大；基于该序列建立的检测牦牛AstV的RT-PCR方法特异性好，灵敏度高，稳定性好，为牦牛AstV的检测和流行病学调查提供了有力工具；同时，本试验结果也提示牦牛AstV与犊牦牛腹泻有联系。

牦牛；星状病毒；RT-PCR；ORF2基因；遗传变异

牛星状病毒(bovine astrovirus，BAstV)是于1978年从英国7日龄犊牛腹泻粪便中首次分离并命名的，由于该病毒感染SPF牛后未引起腹泻症状，被认为是无致病性的[1]。然而，1984年G.N.Woode等的研究发现BAstV分离株US1接种SPF牛后虽然不能引起临床症状，但能够引起牛回肠圆顶上皮细胞中的M细胞发生病变，并且粪便颜色由棕变黄；同时，该研究还表明BAstV单独存在时不能导致牛发生腹泻症状，但与其他病毒(如轮状病毒、冠状病毒等)混合感染时引起的临床症状更加严重[2]。近年的流行病学资料也表明，BAstV与犊牛腹泻有联系[3-5]。……