曾婷婷，谢芝勋，谢丽基，邓显文，谢志勤，罗思思，黄　莉，黄娇玲

(广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点试验室，南宁 530001)



应用多重GeXP-PCR同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的研究

曾婷婷，谢芝勋*，谢丽基，邓显文，谢志勤，罗思思，黄莉，黄娇玲

(广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点试验室，南宁 530001)

拟建立一种基于GeXP多基因表达分析系统的多重PCR方法，同时检测6种鸡免疫抑制病病毒——鸡马立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亚群)、禽网状内皮组织增生症病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性贫血病毒和传染性法氏囊炎病毒。多重PCR反应使用嵌合引物和通用引物组合的反应体系，经过GeXP多基因表达分析系统进行毛细管电泳，鉴别PCR产物片段；通过调整嵌合引物浓度、Mg2+浓度、Taq酶浓度优化反应体系及调整退火温度和时间优化反应条件。应用建立的多重GeXP-PCR，分别单独和同时检测6种鸡免疫抑制病病毒的8个目的基因，同时以其他常见禽类病毒和鸡组织器官核酸为对照，验证其特异性；检测8个目的基因不同浓度的克隆质粒，验证其敏感性；应用建立的多重PCR检测300份临床样品，并同时用荧光定量PCR和测序验证其检测结果的准确性。结果表明建立的多重GeXP-PCR方法能够分别扩增出6种病毒，8个特异性目的片段，不能扩增其他常见禽类病毒和鸡组织器官的基因；在低至100 copies·20 μL-1的水平能同时特异性地检测出6种鸡免疫抑制病病毒核酸；检测300份临床病死鸡样品，190份样品显示为阳性，PCR和测序结果与多重GeXP-PCR结果相符。……