孙鹏，谷静逸，尹海波，张建逵，贾晓晴，邵飞

（1.沈阳市第七人民医院，辽宁 沈阳 110003；2.辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600）

老鹳草，始见于明代兰茂的《滇南本草》[1]，是我国传统中药，来源于牻牛儿苗科植物牻牛儿苗(Erodiumstephanianum Willd)、老鹳草(Geranium wilfordii Maxim)或野老鹳草(G carolinianumL)的干燥地上部分，收载于我国2015年版《药典》[2]。我国有牻牛儿苗科植物4属，约67种，其中老鹳草属植物55种[3]，其中分布于辽宁省的有7种，分别为老鹳草(Geranium wilfordii Maxim)、鼠掌老鹳草(Geranium sibiricum L)、块根老鹳草(Geranium dahuricum DC)、突节老鹳草 (Geranium Krameri Franch.et Sav Enum)、朝鲜老鹳草(Geranium franchetii R.Kunth)、长白老鹳草(Geranium baishanense Y.L.Chang)和毛蕊老鹳草(Geranium eriostemon Fish.ex DC)[3-5]。本研究利用ISSR分子标记技术，揭示了辽宁省老鹳草属植物资源的亲缘关系及群体间的遗传多样性。

1 材料

供试材料均于2014和2015年7-9月采自辽宁省东部山区的21个居群，均经大连自然博物馆张淑梅教授和辽宁中医药大学药用植物教研室尹海波教授鉴定,具体信息见表1。

表1 样品基本信息

2 方法

2.1 DNA提取

将存储在-80℃冰箱内的实验材料取出，迅速置于研钵中充分研磨。按照TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒的说明进行DNA的提取，用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测，各个电泳道均出现一条清晰的DNA条带，即所提取的DNA均完整。

2.2 ISSR引物的选择

本实验所用ISSR引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，源自University of British Columbia（UBC大学）公布的100条ISSR引物。根据相关论文[6]，结合本实验材料，从中筛选出扩增产物条带清晰、多态性较好的引物用于不同种老鹳草亲缘关系的分析。

2.3 老鹳草属植物ISSR-PCR最佳反应体系的建立

PCR反应体系的优化是ISSR技术获得较好研究结果的先决条件[7]，本实验通过对退火温度、引物浓度和DNA模板量进行优化，建立了PCR的最佳反应体系。……