张家玲，薛良义，史钧信

(宁波大学 海洋学院， 宁波 315211)

蓝点马鲛鱼内参基因的克隆及表达稳定性评价

张家玲，薛良义，史钧信

(宁波大学 海洋学院， 宁波 315211)

摘 要合适内参基因的选择是实时荧光定量PCR技术准确测定目的基因表达量的前提。首先克隆了蓝点马鲛鱼3个内参基因β-actin、GAPDH和EF1-α的部分序列，并通过实时荧光定量PCR分析β-actin、GAPDH、EF1-α和18S rRNA 4个内参基因在蓝点马鲛鱼各组织中的Ct值，应用3种内参基因筛选软件(geNorm，NormFinder和Bestkeeper)综合分析这4个基因的表达稳定性。结果表明最稳定的内参基因是EF1-α，其次是18S rRNA。研究结果为今后蓝点马鲛鱼合适内参基因的选择提供了依据。

关键词蓝点马鲛鱼；实时荧光定量PCR；内参基因；geNorm软件；表达稳定性

实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qPCR)技术比传统的半定量及Northern杂交等方法具有灵敏度高、特异性强、快速准确等优势，可以更准确分析基因表达差异，成为基因表达水平测定的最常用的方法[1, 2]。但是，这种方法的准确性受到多种因素的影响，包括RNA的质量、cDNA反转录酶的活性、PCR扩增效率及合适的内参基因等[3, 4]，其中内参基因的选择是一个至关重要的环节。内参基因在生物体不同组织、不同发育时期或不同实验条件下具有相对稳定的表达特性[5-7]。但是，近年的研究表明，在不同实验体系中，内参基因的表达稳定性是不一样的。Olsvik等对大西洋鲑鱼8种组织中6个内参基因的表达稳定性进行分析，结果表明：在肌肉、肝脏、腮、头肾、脾脏、胸腺中EF1AB是最稳定的；在脑和肠中最稳定的分别是EF1AA和β-actin。GAPDH在肝脏、头肾、脾脏、脑和胸腺中稳定性最差。……