朱　韬, 朱冬发, 邱锡尔, 周彦琦, 柳志业, 谢　熙

(宁波大学 海洋学院， 宁波 315211)

三疣梭子蟹fps克隆及其在卵巢发育中的表达分析

朱韬, 朱冬发, 邱锡尔, 周彦琦, 柳志业, 谢熙

(宁波大学 海洋学院， 宁波 315211)

摘要法尼基焦磷酸合成酶(FPS)是类异戊二烯生物合成途径中的关键酶，参与甲壳动物甲基法尼酯(MF)等萜类激素的合成。为研究FPS在甲壳动物卵巢发育中的调控作用，采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到了三疣梭子蟹fps(Ptfps)的序列全长(GenBank登录号：KM013803)。结果显示：Ptfps cDNA全长为2 360 bp，开放阅读框长1 290 bp，编码429个氨基酸。生物信息学分析发现PtFPS具有7个异戊烯基转移酶的保守结构域，与已公布的内华达古白蚁FPS同源性最高(达到58%)。实时荧光定量PCR分析结果显示：fps主要在大颚器(MO)中表达，远高于其它组织的表达水平 (P<0.01)；在第1次卵巢发育过程中， fps的表达水平在Ⅳ期显著升高(P<0.05)，之后略有下降；在第2次卵巢发育过程中，fps的表达水平在Ⅲ期显著升高(P<0.05)，并在IV期达到最大。以上结果表明fps可能参与三疣梭子蟹卵巢发育的调控。

关键词三疣梭子蟹；法尼基焦磷酸合成酶；克隆；卵巢发育；表达水平

法尼基焦磷酸合成酶(farnesyl diphosphate synthase，FPS)是一种异戊烯基转移酶，催化牻牛儿基焦磷酸(geranyl pyrophophate，GPP)与异戊烯基焦磷酸(isopentenyl diphosphate，IPP)头尾缩合生成法尼基焦磷酸(farnesyl pyrophophate，FPP)[1]。产物FPP是多种类异戊二烯物质的前体化合物，包括长萜醇、泛醇、类固醇和其他异戊烯蛋白等[2]。与脊椎动物不同，甲壳动物和昆虫在合成FPP后，由于缺乏羊毛脂固醇合成酶和鲨烯合成酶而无法合成胆固醇[3]，取而代之的是倍半萜类物质。甲基法尼酯(methyl farnesoate，MF)就是FPP经催化生成的一种重要的类倍半萜烯激素。从1958年起，科学家研究并证明了MF是昆虫保幼激素Ⅲ(Juvenile hormone Ⅲ，JH Ⅲ)的前体类似物，其结构和功能与之相似，在甲壳动物的蜕皮、变态、应激性调节和卵巢发育等生理活动方面有重要作用[4]。……