马　俊，　张　洋，　丛丽娜，　李　成

大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034

海参i-型溶菌酶在毕赤酵母基因工程菌中优化表达及纯化

马俊，张洋，丛丽娜*，李成

大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034

摘要：将实验室已构建的毕赤酵母基因工程菌(pPIC9K-SjLys/GS115)作为海参i-型溶菌酶生产菌株，本研究分别从甲醇浓度、培养基pH、温度和诱导时间对其产酶发酵条件进行优化。实验得出甲醇诱导浓度为1.0%，发酵培养基初始pH 6.0，温度30 ℃，培养96 h为最佳目的蛋白表达条件，其发酵液中海参i-型溶菌酶含量达10.63 mg/L。将发酵液经离心和超滤浓缩后得到上清液，再经离子交换和凝胶过滤层析纯化获得海参i-型溶菌酶产品，其酶活力达826.44 U/mg。经测定该酶对革兰氏阳性菌溶壁微球菌和革兰氏阴性菌副溶血弧菌均具有明显的抑菌作用。

关键词：海参i-型溶菌酶； 毕赤酵母； 发酵条件优化； 酶活性

溶菌酶广泛分布于不同生物体中，同时作为先天免疫因子具有较广的抗菌谱[1]。它通过破坏细菌细胞壁中肽聚糖的β-1，4糖苷键，从而使其原有结构受到破坏造成菌体死亡[2]。溶菌酶作为一种天然的蛋白质具有对人体无毒性，易吸收，不污染等特性[3]。根据溶菌酶的来源分类可为动物溶菌酶、植物溶菌酶、微生物溶菌酶和噬菌体溶菌酶。同时动物溶菌酶包含三种类型，即c-型溶菌酶、g-型溶菌酶和i-型溶菌酶。i-型溶菌酶最早由Jolles于1975年在欧洲海星中发现[4]，随后相继在贝类、虾、海参、海胆等海洋生物中发现该类菌酶[5,6]。海参i-型溶菌酶基因由本实验室于2007年首次分离和鉴定[7]；……